巴马小型猪SLA-2和β2m复合体蛋白的构建及二级结构测定分析

摘要：

以巴马小型猪为研究材料,克隆SLA-2和β2m基因.然后采用剪接重叠延伸PCR(Splicing overlap extention PCR,SOE PCR)法,将SLA-2的胞外区和β2m的成熟肽部分通过一富含甘氨酸/丝氨酸的Linker(G4S)3连接,形成SLA-2-Linker-β2m.将SLA-2-Linker-β2m在pMAL-p2X系统上表达,其融合表达蛋白分别经过Western-blot、纯化及Factor Xa切割,分离纯化单体蛋白.圆二色谱(Circular dichroism spectrum,CD)测定蛋白的二级结构.结果显示,重构表达的复合体融合蛋白MBP-SLA-2-(G4S)3-β2m大小为84.1 ku.切割后去除MBP的单体蛋白大小为41.6 ku.圆二色谱分析单体蛋白和融合蛋白二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲的符合率分别达到了100%、97.3%、97.1%和97.9%,揭示重构的复合体具有正确的二级结构,可以用于体外多肽结合等研究.

关键词：猪、圆二色谱、SLA-2、β2m

所属期刊栏目：38

分类号：Q78;S852.4(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30371098

在线出版日期：2007-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：263-270