重叠延伸PCR法体外重建鸡主要组织相容性复合体Ⅰ

摘要：

本研究旨在体外重建鸡主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(MHC Ⅰ)重链(α链)胞外区与轻链(β2m)成熟肽的重组嵌合分子.采用RT-PCR法分别扩增鸡MHC Ⅰ的重链胞外区和轻链的成熟肽序列;采用重叠延伸PCR(Splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把通过45个碱基的链连接的鸡MHC Ⅰ重链胞外区基因和轻链成熟肽基因重组到可溶性表达质粒pMAL-p2X进行可溶性表达.经琼脂糖凝胶电泳证明RT-PCR可分别扩增出鸡MHC Ⅰα链胞外区基因和β2m成熟肽基因,大小符合预期.采用MHC Ⅰα链胞外区序列的反义引物与β2m成熟肽基因正义引物有15个碱基重叠的两对引物,以MHC Ⅰα链胞外区序列与p2m成熟肽序列PCR产物的混合物作为模板,进行重叠延伸获得了预期大小的连接片段;测序显示重组质粒上MHC Ⅰα链胞外区序列与轻链β2m成熟肽基因的靶序列由一柔性的linker相连,阅读框正确且无移码.本研究表明SOE-PCR是体外重构鸡MHC Ⅰ的一种简捷可行方法.

关键词：鸡、主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)、重链、轻链、重叠延伸PCR

所属期刊栏目：37

分类号：S852.4;R392.13(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金30371098

在线出版日期：2006-12-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1047-1052