牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83和ESAT-6的融合表达及重组蛋白的初步应用

摘要：

应用PCR方法从牛分枝杆菌Vallee株基因组中扩增获得mpb70、mpb83和esat-6三个目的基因片段.采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE)获得融合基因mpb70-mpb83后,将mpb70-mpb83和esat-6串连于同一表达载体pET32a(+)中得到重组质粒pET70-83-E6.转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态后,经IPTG诱导以可溶的形式表达融合蛋白.用Ni2+亲合层析的方法纯化该融合蛋白.Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛副结核病阳性血清不反应.用该纯化蛋白初步建立了间接ELISA方法,并检测了117份临床血清样本(其中67份为PPD阳性牛血清),阳性率为39.32%(46/117)份,与PPD皮试诊断的符合率为82.05%(96/117).

关键词：牛分枝杆菌、融合表达、ELISA

所属期刊栏目：37

分类号：S852.61+8(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家"火炬计划"2002.BA518A04

在线出版日期：2006-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：676-680