应用LD-PCR法构建大片吸虫成虫cDNA表达文库

摘要：

为构建大片吸虫成虫cDNA表达文库,用Trizol试剂提取大片吸虫成虫总RNA,经反转录合成cDNA第一链,应用LD-PCR扩增方法,合成双链cDNA.用SfiⅠ内切酶修饰此双链cDNA,使形成两端分别带有SfiⅠ A和SfiⅠ B的黏性末端.经CHROMA SPIN-400柱纯化,收集400 bp以上的双链cDNA片段,将其连接于带有SfiⅠ A和SfiⅠ B末端的λTriplEx2噬菌体载体,经体外包装后,以XL1-Blue为受体菌构建cDNA表达文库.经测定,库容量为1.08×106PFU/mL,重组率为96.6%.扩增后的文库滴度为2.41×109PFU/mL,插入片段平均大小约为1 000 bp.这些结果表明已成功构建大片吸虫成虫cDNA表达文库,适合进一步筛选大片吸虫新基因.

关键词：LD-PCR、大片吸虫、cDNA表达文库

所属期刊栏目：36

分类号：S852.73;Q785(动物医学（兽医学）)

资助基金：中国科学院资助项目30260082;广西自然科学基金桂科基0448001

在线出版日期：2006-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1183-1186