鸡β-防御素-1cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达

摘要：

从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT-PCR)扩增出鸡β-防御素-1(Gallinacin-1,Gal-1)cDNA,将扩增产物与pGEM-T Easy载体相连,经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为198bp,与报道的Gal-1cDNA编码区碱基序列完全相同.分析核苷酸序列表明Gal-1与火鸡异嗜性白细胞肽-1(Turkey heterophil pep-tides,THP-1)具有85.4%同源性.氨基酸序列方面Gal-1与THP-1同源性最高,为72.7%.将Gal-1基因成熟肽片段插入到酵母表达载体pPICZα-C,构建重组表达载体pPICZα-C-gal-1,电转入表达宿主菌X-33,Zeocin抗性筛选重组菌株.挑取阳性菌株经甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE电泳发现在约4.5 ku位置出现预期条带.对其抗菌活性检测发现具有抗大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等细菌的活性.反相高效液相色谱表明阳性菌株表达产物与标准品在层析柱中保留时间一致.

关键词：鸡、β-防御素-1、克隆、毕赤酵母、表达

所属期刊栏目：36

分类号：S831.2;S852.4+2(家禽)

资助基金：广东省科技攻关项目2002B21404;广东省科技攻关计划2004A20106001

在线出版日期：2005-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：767-772