巢式PCR检测隐孢子虫卵囊的研究

摘要：

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病.为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作起始PCR(Primary-PCR)模板,以起始PCR的产物为模板进行巢式PCR(Nested-PCR),用2对人工合成寡核苷酸分别作为两个PCR的引物,扩增片段大小分别为1325 bp和820 bp.优化了Mg2+浓度、引物浓度和dNTP浓度,并进行了特异性检验.建立的巢式PCR具有隐孢子虫属特异性,不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段,而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段.样品经过初步纯化之后,起始PCR和巢式PCR最低检测值卵囊分别为2.86×103个/ml和≤2.86个/ml;从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA,尔后经过DNA纯化试剂盒纯化.其起始PCR和巢式PCR粪便中卵囊最低检测值分别为2.86×107个/g和≤2.86个/g.有望发展为试剂盒.

关键词：隐孢子虫卵囊、巢式PCR

所属期刊栏目：34

分类号：S858.29(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金30170695;河南省杰出青年科学基金

在线出版日期：2003-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：509-514