表达绿色荧光蛋白的伪狂犬病毒Bartha-K61株TK-突变株的构建

摘要：

提取伪狂犬病毒(PRV)Bartha K61株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的PRV Ka-plan株UL区UL25、UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL25、全部UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失270个核苷酸.将L片段和R片段克隆于pBluescript M13-载体上,获得pSKLR;再将绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1上含GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLRG.提取pSKLRG质粒,经单酶切线性化后用脂质体与PRV Bartha-K61株共转染143TK-细胞,在细胞培养液中有5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)存在的条件下筛选出表达绿色荧光蛋白的重组PRV Bartha-K61毒株:PRV rBGFP.

关键词：伪狂犬病毒Barth K61株、TK基因、EGFP基因、TK基因缺失、转移载体、重组病毒

所属期刊栏目：34

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省科技厅资助项目鲁科技字991154402

在线出版日期：2003-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：476-482