应用噬菌体肽库技术定位沙门氏菌鞭毛蛋白上属特异性共同抗原表位

摘要：

用生物素标记的沙门氏菌属特异性单克隆抗体de7作为分子探针,应用亲和筛选法从噬菌体肽库中筛选该单抗所针对的表位克隆,最终进行定位.经三轮筛选后,用斑点印迹法检测,得到良好的富集效果.通过免疫筛选法从第三轮筛选物中挑取了24个阳性克隆,再以斑点印迹、竞争ELISA进一步鉴定阳性克隆,证实已获得了沙门氏菌鞭毛属特异性共同抗原的模拟表位.测得的序列为SRRSFTTTE,将其与沙门氏菌鞭毛蛋白氨基酸序列相比较,同源性较小,但在不同血清型沙门氏菌鞭毛蛋白氨基酸序列的Ⅰ区高度保守序列中,发现61-65位氨基酸的RSXXT序列与所得的线性表位有相同的排列,而大肠杆菌鞭毛蛋白氨基酸在此段的序列为RAXXT,且这种序列排列的几率为1/205,因此推断该单抗所针对的表位在该区段上.此外,以阳性克隆免疫Balb/c小鼠,并制备高免血清进行间接荧光检测和竞争ELISA鉴定,结果表明其具有优良的免疫原性和高度的特异性,这亦为模拟表位疫苗的研究提供了新思路.

关键词：沙门氏菌、鞭毛蛋白、属共同抗原表位、模拟表位、噬菌体肽库、表位定位

所属期刊栏目：34

分类号：S852.31(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金39670057;教育部霍英东教育基金会高等院校青年教师基金;江苏省应用基础研究计划项目BJ2000028

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：183-187