伪狂犬病毒gG基因的表达及gG-LAT诊断方法的建立

摘要：

依据伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus PRV)Rice株序列合成针对gG基因的特异性引物,从PRV鄂A株中扩增出gG基因,并将其克隆到pBluescriptⅡSK+质粒中并测序,用SacⅠ和HindⅢ酶切,将gG基因融合到pET-28a质粒中T7启动子下游,构建成原核表达质粒pET-28a-gG1,结果并未获得表达.再用NotⅠ切除gG基因后小半部分片段,构建成原核表达质粒pET-28a-gG2,使其在E.coli BL21(DE3)中以IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达特异带为47KDa,斑点杂交证实表达产物具有抗原性.表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在于细菌裂解液的上清之中,上清经饱和硫酸铵溶液沉淀,透析,PEG20 000浓缩,ELISA分析表明,经初步纯化的表达产物可与抗PRV猪血清发生特异性免疫反应.用该产物致敏空白乳胶建立gG-乳胶凝集试验(gG-LAT),检测340份血清,结果表明gG-LAT能区分gG基因缺失疫苗活苗免疫猪与自然感染野毒的血清学阳性猪,且特异性强、敏感性高.

关键词：PRV、gG基因表达、大肠杆菌、gG-ELISA、gG-LAT

所属期刊栏目：34

分类号：S582.1(野生植物)

资助基金：国家科技攻关项目96-C01-04-03

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：72-76