产气荚膜梭菌β-毒素基因的克隆及CPB-ST融合基因的构建

摘要：

用聚合酶链式反应(PCR)技术,从B型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了930bp的β-毒素基因.用限制性核酸内切酶BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ对PCR产物进行双酶切处理,然后,通过T4 DNA连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒pET-28C(+)的多克隆位点,转化至受体菌BL21(DE3)中.经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切分析和PCR扩增检测.证明重组质粒pECB2中含有产气荚膜梭菌的β-毒素基因.经核苷酸序列分析,明确了克隆的β-毒素基因在重组质粒中的连接向位和阅读框架是正确的.利用已构建的另一重组质粒pXST1(带有肠毒素性大肠杆菌的耐热性肠毒素ST基因),通过EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切处理,将切下的ST基因片段定向连接到pECB2重组质粒中CPB基因的下游.经特定酶切分析鉴定,得到了理想重组子质粒pECB-ST1,CPB-ST融合基因在重组质粒pECB-ST1中的连接向位是正确的.

关键词：产气荚膜梭菌、β-毒素基因、ST基因、融合基因

所属期刊栏目：31

分类号：S852.65+(动物医学（兽医学）)

资助基金：中国科学院资助项目

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：372-378