胰腺星状细胞和胰腺癌细胞在胰腺癌血管生成中作用的体外研究

摘要：

目的:探讨胰腺星状细胞（PSCs）和胰腺癌细胞（PCCs）在胰腺癌血管生成中的作用以及机制。方法:采用实验研究方法。体外培养人PSCs、PCCs和人脐静脉内皮细胞（HUVECs）。采用不同种类和浓度PSCs和（或）PCCs的上清液和基质金属蛋白酶（MMP）抑制剂处理HUVEC；以仅加入内皮细胞完全培养液（C/E组）和仅加入DMEM/Ham's F12（D/F组）作为对照。观察指标：（1）不同条件下HUVECs的增殖。（2）不同条件下HUVECs的血管生成。（3）不同条件下HUVECs的迁移。（4）PSCs和PCCs上清液中MMP-2的表达水平。（5）MMP抑制剂GM6001对HUVECs迁移的影响。正态分布的计量资料以
x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-
t检验。
结果:（1）不同条件下HUVECs的增殖。5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）掺入法检测HUVECs增殖结果显示：D/F组，不同浓度（25%、50%、75%、95%）PSCs单培养上清液孵育HUVECs的EdU结合率分别为12.4%±1.0%，24.5%±2.9%、25.3%±3.0%、22.8%±2.0%、22.9%±2.8%，上述各组比较，差异有统计学意义（
F=8.60，
P<0.05）。不同浓度PSCs单培养上清液孵育HUVECs的EdU结合率分别与D/F组比较，差异均有统计学意义（
P<0.05）。D/F组，不同浓度（25%、50%、75%、95%）PCCs单培养上清液孵育HUVECs的EdU结合率分别为12.4%±1.0%，30.0%±3.2%、32.1%±1.0%、32.3%±3.5%、26.2%±5.6%，上述各组比较，差异有统计学意义（
F=11.93，
P<0.05）。不同浓度PCCs单培养上清液孵育HUVECs的EdU结合率分别与D/F组比较，差异均有统计学意义（
P<0.05）。（2）不同条件下HUVECs的血管生成。D/F组、PSCs单培养上清液孵育HUVECs血管生成的数量分别为（15.2±2.3）个、（49.7±3.2）个，血管总长度分别为（12.1±1.5）mm、（39.8±2.3）mm，两组上述指标比较，差异均有统计学意义（
P<0.05）。（3）不同条件下HUVECs的迁移。单细胞追踪实验结果显示：不同浓度PSCs、PCCs单培养上清液孵育HUVECs迁移速度均较D/F组增快，其增强效应呈剂量依赖性。不同比例PSCs和PCCs单培养物理混合上清液以及PSCs和PCCs共培养上清液孵育HUVECs的迁移速度均较D/F组增快，且共培养条件下迁移速度高于单培育物理混合条件，呈现出协同效应。（4）PSCs和PCCs上清液中MMP-2的表达水平。明胶酶谱法检测结果显示：MMP-2表达水平由高到低依次为PSCs和PCCs共培养上清液、PSCs单培养上清液、PSCs和PCCs单培养物理混合上清液、PCCs单培养上清液。（5）MMP抑制剂GM6001对HUVECs迁移的影响。单细胞示踪法结果显示：加入不同浓度（0、1、10、25 μmol/L）GM6001后，PSCs单培养上清液孵育HUVECs的迁移速度分别为（25.70±2.06）μm/h、（18.37±1.61）μm/h、（16.20±0.26）μm/h、（15.99±0.58）μm/h，上述各组比较，差异有统计学意义（
F=11.39，
P<0.05）。加入1、10、25 μmol/L GM6001后PSCs单培养上清液孵育HUVECs的迁移速度分别与未加入GM6001比较，差异均有统计学意义（
P<0.05）。加入不同浓度（0、1、10、25 μmol/L）GM6001后，PSCs和PCCs共培养上清液孵育HUVECs的迁移速度分别为（30.06±3.70）μm/h、（22.76±1.56）μm/h、（23.87±2.84）μm/h、（22.10±2.35）μm/h，上述各组比较，差异有统计学意义（
F=4.06，
P<0.05）。加入1、10、25 μmol/L GM6001后PSCs和PCCs共培养上清液孵育HUVECs的迁移速度分别与未加入GM6001比较，差异均有统计学意义（
P<0.05）。
结论:PSCs和PCCs均能刺激体外培养的HUVECs增殖、迁移和血管生成。PSCs和PCCs相互作用释放刺激内皮细胞重要因子MMP-2，从而增加血管生成的刺激活性和内皮细胞迁移能力。

关键词：胰腺肿瘤、胰腺星状细胞、血管生成、基质金属蛋白酶、体外研究

所属期刊栏目：22

资助基金：国家自然科学基金81100251;National Natural Science Foundation of China81100251

在线出版日期：2023-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：623-630