血红素氧合酶-1对大鼠肝移植缺血再灌注损伤后缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响

摘要：

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对大鼠肝移植缺血再灌注损伤后肝脏组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、VEGF的表达和肝内血管再生的影响.方法 采用实验研究方法.240只大鼠按随机数字表法,分为3组,每组80只,空病毒组大鼠转染空病毒,诱导组大鼠转染HO-1过表达腺病毒,抑制组大鼠转染HO-1 RNAi腺病毒.大鼠进行1∶1配对,选取体质量较小者作为供体,体质量较大者作为受体,参照“二袖套”法大鼠肝移植模型行肝移植.供、受体大鼠均于手术前24 h经尾静脉注射腺病毒.(1)术前腺病毒转染效率检测:注射腺病毒后12、24 h,Western blot检测3组大鼠肝脏组织中HO-1的表达量.(2)肝移植术后受体大鼠肝功能检测:肝移植术后1、3、7、14 d检测3组受体大鼠肝功能指标(ALT、AST、ALP、GGT).(3)肝移植术后受体大鼠肝组织病理形态学和损伤评分:术后1d和14 d取受体大鼠肝脏组织制备成石蜡切片,HE染色观察,并采用Suzuki损伤评分标准评价.(4) Western blot检测受体大鼠肝脏组织中HIF-1α、VEGF、HO-1相对蛋白表达量.(5)免疫荧光染色检测3组受体大鼠肝移植术后14 d肝脏组织中血管性血友病因子(vWF),计数小血管数量.正态分布的计量资料以(x)±s表示,两组间比较采用独立样本的t检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD检验.结果 (1)术前腺病毒转染效率检测:空病毒组、诱导组和抑制组大鼠术前注射腺病毒12 h时肝脏组织中HO-1相对表达量分别为1.08±0.16、1.18±0.21、0.87±0.26,24 h时分别为1.08±0.26、1.39±0.19、0.57±0.12,3组不同时间点比较,差异均有统计学意义(F=4.232,36.513,P＜0.05).(2)肝移植术后受体大鼠肝功能情况:肝移植术后3d空病毒组、诱导组和抑制组大鼠ALT分别为(504±67) U/L、(438±47) U/L、(490±39) U/L,3组比较,差异有统计学意义(F=3.517,P＜0.05).肝移植术后7d空病毒组、诱导组和抑制组大鼠ALT分别为(443±49)U/L、(382±49)U/L、(493±44) U/L,AST分别为(430±34) U/L、(372±50)U/L、(455±62) U/L,ALP分别为(455±38) U/L、(394±25) U/L、(470± 72) U/L,3组上述指标比较,差异均有统计学意义(F=10.950,5.667,5.398,P＜0.05).肝移植术后14 d空病毒组、诱导组和抑制组大鼠ALT分别为(394±46) U/L、(283±47) U/L、(446±43) U/L,AST分别为(361±68)U/L、(288±60) U/L、(422±51) U/L,ALP分别为(417±17) U/L、(332±46) U/L、(423±63) U/L,GGT分别为(4.5±1.1)U/L、(2.5±0.5)U/L、(4.3± 1.3) U/L,3组上述指标比较,差异均有统计学意义(F=26.906,9.924,8.013,9.279,P＜0.05).(3)肝移植术后受体大鼠肝脏组织病理形态学和损伤评分:肝移植术后1d空病毒组、诱导组和抑制组大鼠肝脏组织均见细胞肿胀,胞质疏松,汇管区见数量不等炎性细胞浸润.术后14 d空病毒组大鼠见汇管区仍有少量炎症细胞浸润,肝细胞排列基本正常,但稍显肿胀.诱导组大鼠见肝细胞肿胀较前减少、肝小叶结构基本正常.抑制组大鼠见肝细胞出现小片状、局灶性坏死,汇管区大量炎症细胞浸润、胆管结构破坏.空病毒组、诱导组、抑制组受体大鼠肝移植术后1 d Suzuki损伤评分分别为(6.7±1.7)分、(6.1±1.2)分、(7.6±1.3)分,3组比较,差异无统计学意义(F=2.257,P＞0.05).术后14 d Suzuki损伤评分分别为(4.0±0.8)分、(2.9±0.8)分、(5.1±1.4)分,3组比较,差异有统计学意义(F=9.776,P＜0.05).(4) Western blot检测结果显示:空病毒组、诱导组和抑制组受体大鼠肝移植术后1d肝脏组织中相关蛋白的相对表达量:HIF-1α分别为0.21±0.10、0.23±0.09、0.17±0.06,VEGF(43 KD)分别为0.30±0.12、0.34±0.14、0.29±0.11,3组上述指标比较,差异均无统计学意义(F=0.902,0.410,P＞0.05);VEGF(24 KD)分别为1.21±0.25、2.13±0.40、0.91±0.22,HO-1分别为0.55±0.12、0.72±0.12、0.26±0.07,3组上述指标比较,差异均有统计学意义(F=35.158,39.082,P＜0.05).空病毒组、诱导组和抑制组受体大鼠肝移植术后7d肝脏组织中相关蛋白的相对表达量:HIF-1α分别为0.49±0.22、0.83±0.26、0.24±0.09,VEGF(43 KD)分别为0.46±0.13、0.63±0.19、0.30±0.12,VEGF(24 KD)分别为0.98±0.37、1.60±0.33、0.64±0.18,HO-1分别为0.98±0.37、1.49±0.46、0.75±0.26,3组上述指标比较,差异均有统计学意义(F=16.853,10.021,20.756,8.156,P＜0.05).(5)免疫荧光染色检测结果显示:空病毒组、诱导组、抑制组大鼠肝移植术后14 d小血管数量分别为(7.9±2.0)条、(10.6±1.9)条、(7.6±1.9)条,3组比较,差异有统计学意义(F=5.921,P＜0.05).结论 HO-1能够促进大鼠肝移植缺血再灌注损伤后肝脏组织中HIF-1α和VEGF表达并增加肝内血管再生,明显减轻肝移植术后胆道缺血再灌注损伤.

关键词：缺血再灌注损伤、肝移植、血红素氧合酶-1、血管再生

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分类号：R65;R-3

资助基金：国家自然科学基金项目81360079;云南省肝、肾移植创新团队2009CI009National Nature Science Foundation of China81360079;Innovation Team in Organ Liver and Kidney Transplantation Field of Yunnan Province2009CI009

在线出版日期：2017-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：955-962