细胞外信号调节激酶及蛋白激酶B信号通路在微RNA-21促进胆管癌细胞侵袭转移中的作用

摘要：

目的 观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及蛋白激酶B(Akt)信号通路在微RNA-21(miR-21)促进胆管癌细胞侵袭转移中的作用.方法 采用实验研究方法.体外培养胆管癌细胞QBC939细胞,通过构建合成无关序列、miR-21 mimics和miR-21 inhibitor并转染到细胞中,将细胞分为4组:cell组:自然生长细胞,21-NC组:转染无关序列,21-M组:转染miR-21 mimics,21-Ⅰ组:转染miR-21 inhibitor.另取21-M组细胞进一步分为2组,分别加入20 μmol/L LY294002和10 μmol/L U0126处理48 h,用于后续实验.检测指标:(1) RT-qPCR检测miR-21在各组胆管癌细胞中的表达.(2) Werstern blot检测各组胆管癌细胞第10号染色体缺失的张力同源性磷酸酶(PTEN)、ERK及Akt蛋白的相对表达量.(3)划痕实验检测各组胆管癌细胞迁移能力.(4) Transwell实验检测各组胆管癌细胞迁移与侵袭能力的影响.正态分布的计量资料以(x)±s表示,两组均数比较采用t检验,多组均数比较采用方差分析,组间两两比较采用Bonferroni检验,重复测量数据采用重复测量方差分析.结果 (1) miR-21在cell组、21-NC组、21-M组及21-Ⅰ组中的相对表达量分别为1.010±0.010、0.980±0.050、4.900±0.350、0.260±0.010,4组比较,差异有统计学意义(F=78.23,P＜0.05).21-NC组miR-21表达分别与cell组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).21-M组miR-21表达较cell组增加,21-Ⅰ组较cell组减少,21-M组和21-Ⅰ组分别与cell组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2) cell组、21-NC组、21-M组、21-Ⅰ组细胞PTEN蛋白相对表达量分别为0.360±0.020、0.400±0.030、0.140±0.010、0.680±0.110,ERK蛋白相对表达量分别为0.045±0.126、0.470±0.140、0.460±0.060、0.440±0.110,p-ERK蛋白相对表达量分别为0.310±0.020、0.380±0.040、0.590±0.060、0.160±0.010,Akt蛋白相对表达量分别为0.400±0.010、0.390±0.080、0.410±0.090、0.380±0.070,p-Akt蛋白相对表达量分别为0.440±0.110、0.510±0.120、0.980±0.150、0.190±0.010,4组细胞PTEN、p-ERK、p-Akt蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(F=10.23,12.78,18.11,P＜0.05),与cell组比较,21-NC组PTEN、ERK、p-ERK、Akt、p-Akt表达,差异均无统计学意义(P＞0.05);而21-M组与cell组比较,PTEN表达减少,p-ERK和p-Akt表达增加,差异有均有统计学意义(P＜0.05);21-Ⅰ组与cell组比较,PTEN表达增加,而p-ERK和p-Akt表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)cell组、21-M组、miR-21+ LY294002组、miR-21+U0126组细胞6～48 h迁移率变化范围为12.0％±3.0％～23.0％±5.0％,21.0％±4.0％～43.0％±7.0％,6.0％±1.0％～18.0％±4.0％,9.0％±2.0％～26.0％±6.0％.与cell组比较,21-M组细胞迁移能力各时间点迁移率更高,两组迁移率变化趋势比较,差异有统计学意义(F=16.23,P＜0.05).miR-21+ LY294002组、miR-21+ U0126组迁移率较21-M组下降,3组迁移率趋势比较,差异有统计学意义(F=25.21,P＜0.05),3组迁移率变化趋势与时间交互效应,具有统计学意义(F=35.31,P＜0.05).(4) cell组、21-M组、miR-21+ LY294002组、miR-21+U0126组迁移细胞数分别为(198±32)个、(248±39)个、(187±23)个、(174±28)个,4组比较,差异有统计学意义(F=8.48,P＜0.05);21-M组与cell组比较,差异有统计学意义(=4.13,P＜0.05);miR-21+LY294002组、miR-21+U0126组迁移细胞数较21-M组下降,3组比较,差异有统计学意义(F=21.98,P＜0.05).cell组、21-M组、miR-21+ LY294002组、miR-21+ U0126组侵袭细胞数分别为(102±22)个、(211±36)个、(55±9)个、(67±13)个,4组比较,差异有统计学意义(F=11.32,P＜0.05);21-M组与cell组比较,差异有统计学意义(t=6.67,P＜0.05);miR-21+ LY294002组、miR-21+ U0126组侵袭细胞数较21-M组下降,3组比较,差异有统计学意义(F=36.23,P＜0.05).结论 ERK及Akt信号通路参与了miR-21促进胆管癌细胞侵袭迁移,PTEN可能介导了miR-21通过ERK及Akt通路促进胆管癌侵袭转移的过程.

关键词：胆管肿瘤、微RNA-21、侵袭、迁移、细胞外信号调节激酶、蛋白激酶B

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资助基金：国家自然科学基金81272397;安徽省教育厅自然科学研究项目KJ2013Z143;National Natural Science Foundation of China81272397;Natural Science Foundation of Department of Education of Anhui ProvinceKJ2013Z143

在线出版日期：2016-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：918-924