COMMD7基因通过细胞外调节蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进肝癌细胞HepG2增殖的研究

摘要：

目的 采用RNA干扰沉默COMMD7基因,观察人肝癌细胞HepG2的变化,探讨其相关作用机制.方法 设计COMMD7基因的干扰RNA片段(shRNA),构建COMMD7-shRNA质粒.将肝癌细胞HepG2分为3组:空白组不做转染,control-shRNA组转染空载体,COMMD7-shRNA组转染阳性载体.转染结束后在荧光显微镜下观察细胞形态.采用Western blot检测COMMD7蛋白的表达.采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡.采用Western blot检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的下游分子ERK1/2和MEK1/2蛋白的表达及其磷酸化水平.符合正态分布的计量资料以(x)±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 荧光显微镜下转染成功的细胞为椭圆形或梭形,呈绿色荧光.Western blot检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2中COMMD7蛋白的相对表达量分别为0.90±0.18、1.03±0.05和0.23 ±0.03,3组比较,差异有统计学意义(F=152.08,P＜0.05);COMMD7-shRNA组COMMD7蛋白相对表达量低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(t=20.74,21.16,P＜0.05).CCK-8检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2细胞活力分别为1.193±0.024、1.225±0.034和1.147 ±0.021,3组比较,差异有统计学意义(F=6.90,P＜0.05);COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2细胞活力低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(t=3.53,3.69,P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2凋亡率分别为6.1％±0.3％、7.8％±0.5％和20.9％±1.4％,3组比较,差异有统计学意义(F=270.80,P＜0.05);COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2凋亡率高于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(=21.77,19.36,P＜0.05).Western blot检测结果显示:空白组、control-shRNA组和COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2中磷酸化-ERK1/2蛋白相对表达量分别为0.932±0.046、0.945±0.017和0.553±0.052,磷酸化-MEK1/2蛋白相对表达量分别为0.452±0.031、0.468±0.027和0.263±0.022,3组比较,差异均有统计学意义(F =93.61,49.16,P＜0.05);COMMD7-shRNA组肝癌细胞HepG2中磷酸化-ERK1/2蛋白相对表达量低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(t=11.94,12.17,P＜0.05);磷酸化-MEK1/2蛋白相对表达量也低于空白组和control-shRNA组,两组比较,差异有统计学意义(=9.33,8.65,P＜0.05).结论 COMMD7基因可通过活化ERK/MAPK信号通路促进肝癌细胞HepG2增殖,其作用机制可能是促进了ERK/MAPK信号通路中ERK1/2、MEK1/2的磷酸化.

关键词：肝肿瘤、HepG2细胞、COMMD7基因、细胞外调节蛋白激酶、丝裂原活化蛋白激酶

所属期刊栏目：14

分类号：R285.5;R392;R737.9

资助基金：国家自然科学基金;重庆市自然科学基金

在线出版日期：2015-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：316-320