10.3760/cma.j.issn.1673-9752.2011.06.013
短发夹RNA干扰质粒与粉防己碱对结肠癌耐药细胞多药耐药性的逆转作用
目的 比较短发夹RNA干扰质粒与粉防已碱对结肠癌LoVo/5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用.方法 用粉防己碱和靶向MDR1的短发夹RNA干扰质粒分别对结肠癌LoVo/5-FU耐药细胞进行处理,实验分为对照组(空白对照)、粉防己碱组和转染组(短发夹RNA干扰质粒).应用MTT法检测细胞对5-FU的敏感性;流式细胞仪检测细胞周期变化、凋亡情况及P-糖蛋白的阳性表达率;RT-PCR法检测MDR1 mRNA的表达情况;Western blot检测P-糖蛋白的表达情况.多组间的比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q检验.结果 (1)细胞对5-FU的敏感性:对照组、粉防己碱组、转染组的药物半数抑制浓度( IC50)分别为(7.3±0.3)、(4.4±0.7)、(2.4±0.4) mmol/L,3组比较,差异有统计学意义(F =65.27,P<0.05);粉防己碱组与转染组比较,差异有统计学意义(q=6.67,P<0.05).(2)细胞周期的变化:对照组、粉防己碱组、转染组G1期和S期细胞所占比例分别为38.13%±3.75%、51.36%±2.76%、59.24%±4.31%和20.46%±2.23%、14.32%±1.91%、9.40%±1.65%,3组比较,差异有统计学意义(F =25.23,24.37,P<0.05);粉防己碱组与转染组比较,差异有统计学意义(q=3.67,4.35,P<0.05).(3)细胞凋亡情况:对照组、粉防己碱组、转染组细胞凋亡率分别为1.32%±0.47%、3.24%±0.26%、5.88%±0.44%,3组比较,差异有统计学意义(F=99.26,P<0.05);粉防己碱组与转染组比较,差异有统计学意义(q=11.48,P<O.05).(4)P-糖蛋白的表达:对照组、粉防己碱组、转染组细胞P-糖蛋白的阳性表达率分别为96.9%±2.3%、61.6%±4.9%、76.6%±3.6%,3组比较,差异有统计学意义(F =67.83,P<0.05);粉防己碱组与转染组比较,差异有统计学意义(q=6.97,P<0.05).(5)MDR1 mRNA表达情况:对照组、粉防己碱组、转染组细胞MDR1 mRNA的相对表达量分别为1462±161、570±85、233±81,3组比较,差异有统计学意义(F=90.59,P<0.05);粉防己碱组与转染组比较,差异有统计学意义(q=5.12,P<0.05).结论 粉防己碱和靶向MDR1的短发夹RNA干扰质粒均能逆转LoVo/5-FU耐药细胞的MDR,且后者逆转作用更强,逆转机制与抑制P-糖蛋白表达及下调MDR1 mRNA表达有关.
结直肠肿瘤、短发夹RNA、粉防己碱、多药耐药基因、P-糖蛋白
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R915(药物基础科学)
山东省医药卫生科研项目2007-QZ015
2012-03-06(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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