Yes相关蛋白通过调控细胞骨架F-actin蛋白表达抑制肿瘤坏死因子-α引起的肠上皮屏障损伤

摘要：

目的:探讨Yes相关蛋白(YAP)在肠上皮屏障损伤中的作用及分子机制。方法:培养人结肠腺癌细胞株Caco-2细胞建立肠上皮屏障模型，分为4组：对照组，正常建好屏障的Caco-2细胞不做任何处理；重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)-α组，建好屏障的Caco-2细胞加入rhTNF-α 100 μg/L刺激细胞；Vector+rhTNF-α组，建好屏障的Caco-2细胞先加入对照质粒pcDNA3.1-vector，24 h后加入rhTNF-α 100 μg/L刺激细胞；YAP+rhTNF-α组，建好屏障的Caco-2细胞先加入YAP质粒pcDNA3.1-YAP，24 h后加入rhTNF-α 100 μg/L刺激细胞。通过实时定量PCR和Western blot检测YAP mRNA和蛋白表达，应用跨膜电阻(TEER)和荧光黄透过率检测细胞膜通透性，免疫荧光染色观察细胞骨架蛋白F-actin分布情况。结果:与对照组[(607.3±29.3)Ω·cm
2]相比，rhTNF-α组TEER[(265.3±32.7)Ω·cm
2]明显下降，而YAP+rhTNF-α组TEER[(387.0±18.7)Ω·cm
2]较rhTNF-α组明显升高，差异均有统计学意义(
P<0.001)。荧光黄透过率结果显示，rhTNF-α组(22.7%±0.5%)较对照组(6.3%±0.9%)明显增加，而YAP+rhTNF-α组(12.2%±0.8%)较rhTNF-α组明显降低，差异均有统计学意义(
P<0.001)。免疫荧光染色结果显示，与对照组相比，rhTNF-α组细胞骨架F-actin纤维致密斑减少，部分细胞出现明显横跨细胞的应力纤维结构，而YAP+rhTNF-α组周边肌动蛋白丝带较清晰，胞质内应力纤维减少。
结论:YAP可抑制TNF-α引起的Caco-2细胞TEER下降、荧光黄透过率增加和细胞骨架F-actin重排。YAP通过调控细胞骨架蛋白F-actin表达从而改善TNF-α介导的肠上皮屏障功能损伤。

关键词：Yes相关蛋白、炎症性肠病、肠上皮屏障、肿瘤坏死因子-α、细胞骨架蛋白F-actin

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资助基金：首都卫生发展科研专项2022-2-2094;Capital′s Funds for Health Improvement and Research2022-2-2094

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：462-467