10.3760/cma.j.issn.1673-4912.2019.11.002
新生鼠高氧性肺损伤模型中肺泡上皮细胞表达密闭小带蛋白-1及密闭小带蛋白-1相关核酸结合蛋白的研究
目的 以往研究已发现高氧性肺损伤时肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell,AECs)存在增殖及转分化异常,本研究旨在明确高氧性肺损伤模型中AECs表达密闭小带蛋白-1( zonula occludens 1,ZO-1)、ZO-1相关核酸结合蛋白(ZO-1-related nucleic acid binding proteins,ZONAB)的情况,探讨其对肺损伤时肺组织中AECs增殖及转分化的影响.方法 足月新生Wistar大鼠于生后12 h内随机分为2组:模型组(吸入氧浓度为85%)和对照组(吸入空气).于暴露7、14、21 d留取肺组织标本,采用组织免疫荧光双标染色观察Ⅱ型肺泡上皮细胞( type Ⅱ alveolar epithelial cells,AECⅡ)表达ZONAB情况.同时,于各时间点分离动物模型肺组织中AECⅡ,通过Western blot和Real-Time PCR等方法检测两组肺组织中及AECⅡ中ZO-1、ZONAB蛋白和mRNA表达水平.另外,从正常新生鼠肺组织分离AECⅡ,分为模型组(氧浓度85%)和对照组(氧浓度21%),在体外培养48 h后检测ZO-1、ZONAB蛋白和基因表达水平,并进行细胞免疫荧光染色观察ZONAB的表达量及表达部位.结果 肺组织免疫荧光双标染色可见模型组AECⅡ表达ZONAB较对照组显著减少.从动物模型肺组织分离的AECⅡ标本中, ZO-1、ZONAB的蛋白及mRNA表达水平从高氧暴露7 d开始较对照组明显减少.从正常新生鼠肺组织分离AECⅡ,在体外高氧条件下培养48 h后,ZO-1、ZONAB的蛋白及mRNA表达水平均较对照组显著降低.细胞免疫荧光染色结果发现,对照组中ZONAB表达较多,且表达部位多位于细胞连接处及细胞核内,而模型组ZONAB表达量较对照组明显减少,且表达部位聚集于胞浆,细胞连接处及核内均表达很少.结论 ZO-1作为紧密连接相关蛋白,其在高氧性肺损伤模型中表达下调,除了破坏肺上皮屏障介导肺水肿发生外,还通过调节转录因子ZONAB表达从而参与AECs增殖及分化的调节,提示这可能是导致高氧性肺损伤发生的又一途径.
高氧、肺泡上皮细胞、转分化、密闭小带蛋白-1、密闭小带蛋白-1相关核酸结合蛋白
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国家自然科学基金81601331National Natural Science Foundation of China81601331
2019-12-19(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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