脓毒症胞外组蛋白对血管内皮细胞毒性作用机制的研究

摘要：

目的：研究脓毒症中胞外组蛋白水平的变化及其对内皮细胞毒性作用机制。方法2010年1月至2014年12月上海儿童医学中心PICU婴儿脓毒症病例130例,根据脓毒症诊断标准分为脓毒症组(51例)和严重脓毒症组(79例),同期健康体检儿童作为对照组(108例)。根据28 d病死率将严重脓毒症组分为生存组(45例)和死亡组(34例)两个亚组。测定各组血清组蛋白浓度,并分析其与疾病严重程度及预后的相关性。培养人脐静脉内皮细胞( human umbilical vein endothelial cell, HUVEC),用小牛胸腺组蛋白(calf thymus histone,CTH)以不同浓度(0、50、100、200及300μg/ml)及不同时间(200μg/ml CHT处理0、5、15、30、45、60 min)处理后,用流式细胞仪检测细胞存活率,以电镜观察细胞的形态学变化,以Western blot检测核因子( nuclear factor,NF)-κB及丝裂原活化蛋白激酶( mitogen-activa-ted protein kinase,MAPK)信号通路中NF-κB抑制因子IκB以及磷酸化p38/p38表达,以ELISA检测肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6表达水平。结果严重脓毒症组患儿血清组蛋白水平(19．17±10．20)显著高于脓毒症组(2．29±1．00)及对照组(0．23±0．26)(P<0．001),并且在严重脓毒症患儿中,死亡患儿血清组蛋白水平显著高于存活者(29．47±5．99 vs．10．94±2．68,P<0．001)。体外实验发现,随CTH处理时间或者剂量增加, HUVEC 的生存率逐步下降。扫描电镜和透射电镜观察 CTH 处理后HUVEC 发现细胞膜破坏现象。组蛋白可以激活NF-κB及MAPK通路,并释放肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6等炎性因子。结论在脓毒症患者中胞外组蛋白浓度与疾病严重程度相关。 CTH可以呈剂量依赖性及时间依赖性诱导HUVEC死亡。胞外组蛋白在脓毒症中通过对血管内皮细胞的毒性作用,介导疾病进程,而这一毒性作用与破坏内皮细胞细胞膜及激活NF-κB及MAPK信号通路有关。

关键词：脓毒症、组蛋白、内皮细胞、多脏器功能不全综合征、炎症介质

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分类号：R56;R64

资助基金：国家自然科学青年基金81201450;上海市科委启明星计划14QA1402900;十二五国家科技支撑计划2012BAI04B01-05;博士后基金面上项目2014M551418Fund program:The National Natural Science Foundation of China81201450;The Morning Star Pro-gram14QA1402900;The Megaprojects of Science Research for the 12th Five-Year Plan2012BAI04B01-05;China Postdoctoral Science Foundation Funded Project2014M551418

在线出版日期：2016-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：516-521