基于PPAR-γ/SFRP5信号通路探究三期辨证中药复方对骨质疏松大鼠破骨细胞增殖分化的作用机制

摘要：

目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体-γ/分泌型卷曲相关蛋白5(PPAR-γ/SFRP5)信号通路探究三期辨证中药复方对骨质疏松大鼠破骨细胞增殖分化的影响.方法 制备骨质疏松大鼠模型,原代分离骨质疏松模型大鼠破骨细胞并培养.取细胞分为对照组(1～6 周均用不含任何药物的培养基培养)、一期组(1～2 周用含增液汤合益骨汤培养基培养,3～6 周用不含任何药物的培养基培养)、二期组(1～2 周培养同一期组,3～4 周用含归脾汤合益骨汤的培养基培养,5～6 周用不含任何药物的培养基培养)和三期组(1～4 周培养同二期组,5～6 周用含独活寄生汤合益骨汤培养基培养),另取细胞分为sh-PPAR-γ组(细胞中转染pSilencer-shPPAR-γ质粒)、sh-NTC 组(细胞中转染 pSilencer-non-target control 质粒)、sh-SFRP5 组(细胞中转染SFRP5-shRNA质粒)、sh-NC组(细胞中转染NC-shRNA质粒)、三期+sh-PPAR-γ组(细胞培养于含增液汤合益骨汤、归脾汤合益骨汤、独活寄生汤合益骨汤的培养基中,同时转染pSilencer-non-target control质粒)、三期+sh-SFRP5 组(细胞培养同三期+sh-PPAR-γ 组,同时转染SFRP5-shRNA质粒)、三期+sh-PPAR-γ+sh-SFRP5 组(细胞培养同三期+sh-PPAR-γ组,同时转染pSilencer-shPPAR-γ质粒和SFRP5-shRNA质粒),TRAP染色检测各组破骨细胞数量,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中PPAR-γ、SFRP5、果蝇无翅基因(Wnt)、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达情况.结果 与对照组比较,一期组、二期组和三期组破骨细胞数量、细胞增殖能力(吸光度值)和细胞中PPAR-γ、SFRP5 蛋白表达量均明显降低(P均<0.05),细胞凋亡率和细胞中Wnt、β-catenin蛋白表达量均明显增高(P均<0.05);三期组破骨细胞数量、细胞增殖能力(吸光度值)和细胞中PPAR-γ、SFRP5 蛋白表达量均明显低于一期组、二期组(P均<0.05),细胞凋亡率和细胞中Wnt、β-catenin蛋白表达量均明显高于一期组、二期组(P均<0.05).与对照组比较,sh-PPAR-γ组、sh-SFRP5 组破骨细胞数量、细胞增殖能力(吸光度值)和细胞中PPAR-γ、SFRP5 蛋白表达量均明显降低(P均<0.05),细胞凋亡率和细胞中Wnt、β-catenin蛋白表达量均明显增高(P均<0.05).与三期组比较,三期+sh-PPAR-γ组,三期+sh-SFRP5 组、三期+sh-PPAR-γ+sh-SFRP5 组破骨细胞数量、细胞增殖能力(吸光度值)和细胞中PPAR-γ、SFRP5 蛋白表达量均明显降低(P均<0.05),细胞凋亡率和细胞中Wnt、β-catenin蛋白表达量均明显增高(P均<0.05);与三期+sh-PPAR-γ组和三期+sh-SFRP5 组比较,三期+sh-PPAR-γ+sh-SFRP5 组破骨细胞数量、细胞增殖能力(吸光度值)和细胞中PPAR-γ、SFRP5 蛋白表达量更低(P均<0.05),细胞凋亡率和细胞中Wnt、β-catenin蛋白表达量均更高(P均<0.05).结论 三期辨证中药复方可抑制骨质疏松大鼠破骨细胞增殖分化,机制与抑制PPAR-γ/SFRP5 信号通路调节Wnt/β-catenin信号通路有关.

关键词：骨质疏松症、三期辨证中药复方、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ、分泌型卷曲相关蛋白5、破骨细胞

所属期刊栏目：32

分类号：R-332(医学研究方法)

资助基金：河南省中医药科学研究专项课题20-21ZYZD03

在线出版日期：2023-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：293-301