人EGFL7真核表达载体的构建及稳定转染EA.hy926细胞系的建立

摘要：

目的 建构对人类表皮生长因子样结构域7(EGFL7)基因真核表达载体以及稳定性转染EA.hy926细胞系的科学评价体系.方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法获得EGFL7的开放阅读框(ORF),借助双酶切方式,使得EGFL7能够被克隆至真核表达载体(pEGFP-N1)中并获取到已经重组好的质粒pEGFP-N1-EGFL7.在进一步接受测序和鉴定处理后,借助电转仪对EA.hy926细胞进行转染,然后通过G418筛查进而建构起稳定性转染EA.hy926细胞系.使用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测EGFL7基因及蛋白在EA.hy926细胞系中的表达.结果 转染EGFL7的EA.hy926细胞的EGFL7基因和蛋白水平均明显高于对照质粒转染组和空白对照组(P<0.05).结论 成功建构人EGFL7真核表达载体并鉴定了EGFL7在EA.hy926细胞系中的过表达,为探讨EGFL7对早产儿支气管肺发育不良的影响奠定基础.

关键词：EGFL7、真核表达载体、稳定转染、EA.hy926细胞系

所属期刊栏目：6

分类号：R722.1(儿科学)

资助基金：广东省自然科学基金项目2018A0303130288

在线出版日期：2023-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

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