无病毒可回复性肝细胞永生化载体的构建和结构鉴定

摘要：

目的 构建不携带病毒基因且可回复的肝细胞永生化载体,优化目前的肝细胞永生化方法.方法 构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的无病毒可回复性肝细胞永生化载体,PCR扩增attB1-Kozak -hTERT(前端)-attB2和attB1 -hTERT(后端)/E2A/eGFP/F2A/neo-attB2,对相应大小条带切胶回收后,通过Gateway重组克隆技术BR反应和LR反应,以及酶切连接,构建最终目的载体PB -hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo.结果 PCR及酶切和测序鉴定均证实成功构建了肝细胞永生化载体PB-hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo,目的基因序列与GenBank报道一致.结论 成功构建不携带病毒基因且可实现回复的肝细胞永生化载体,有望提高永生化肝细胞临床应用的安全性.

关键词：生物人工肝、肝细胞永生化、人端粒酶逆转录酶、piggyBac转座子

所属期刊栏目：17

分类号：S43;S96

资助基金：广东省教育部产学研结合项目2011B090400018;广东省科技计划项目2009B060300020;广东省高等学校人才引进专项资金项目粤财教字[2011]431号

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：61-65