小干扰RNA靶向突变K-Ras基因对人胰腺癌细胞TGFβ1表达的影响

摘要：

背景与目的 研究显示ras基因活化可促使肿瘤细胞分泌多种细胞因子,而ras基因与TGFβ1基因表达之间的关系还未可知.本研究利用小干扰RNA敲除突变k-ras基因,探讨突变k-ras基因对TGFβ1表达及分泌的影响.方法 小于扰RNA瞬时转染靶向突变k-ras后,应用real-time PCR和Western blot方法检测胰腺癌细胞株CFPAC-1、Aspc-1中ras mRNA和蛋白的表达;应用real-time PCR和流式细胞仪检测对胰腺癌细胞TGFβ1表达的影响:应用ELISA方法检测转染前后胰腺癌细胞上清液中TGFβ1浓度.结果 ①以人已知基因无影响的序列阴性对照组为基准计算k-ras mRNA的相对表达量,实验组胰腺癌细胞CFPAC-1和ASPC-1转染后k-ras mRNA表达明显减低,k-ras mRNA表达在转染后48h为最低,抑制率达(75.33±5.50)%.Western blot 检测各组质粒转染的细胞ras蛋白表达,结果显示实验组ras蛋白量较转染试剂对照组、已知基因无影响的序列阴性时照组明显降低.②Real-timePCR结果显爪实验组CFPAC-1和ASPC-1细胞转染后,TGFβ1 mRNA表达量(CFPAC-10.68±0.08;Aspc-10.59±0.09)明显降低(P＜0.05).而流式细胞仪结果显示TGFβ1蛋白表达降低(CFPAC-1组0.30±0.08,ASPC-1组0.33±0.10,P＜0.05).③ELISA法检测实验组CFPAC-1上清液TGFβ1浓度为(1906.87±50.75)ng/ml,较阴性对照组(2072.79±96.98)ng/ml有所降低(P=0.036);实验组Aspc-1细胞上清液TGFβ1浓度(851.47±41.08)ng/ml,较阴性对照组(950.93±31.34)ng/ml有所降低(P＜0.05).结论 人胰腺癌细胞CFPAC-1、Aspc-1中TGFβ1 mRNA和蛋白的表达与ras基因相关.TGFβ1可能是ras基因活化后驱动胰腺癌发生及演变的重要物质.本研究为k-ras突变的胰腺癌治疗提供有益的信息.

关键词：胰腺癌、小干扰RNA、K-ras、TGFβ1

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分类号：R73;TM7

资助基金：杨森科学研究基金项目资助 高等学校博士点专项科研基金资助20060023016

在线出版日期：2011-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：331-334