野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因Ⅱ亚型真核表达载体的构建及其功能

摘要：

目的 构建野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因(NF2)Ⅱ亚型的真核表达载体,观察其在人胚胎肾细胞293(HEK293)中的表达并检测其转染神经鞘瘤细胞(RT4)后的功能.方法 以人胎脑cDNA文库中的NF2Ⅱ亚型基因为模板,应用聚合酶链反应技术扩增野生型NF2 Ⅱ亚型基因,并定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1质粒中;经鉴定正确的重组质粒pEGFP-NF2 Ⅱ亚型,用Lipofectamine 2000脂质体导入人胚胎肾细胞293,通过荧光显微镜和Western Blotting法观察基因表达水平;随后转染大鼠神经鞘瘤细胞,利用水溶性四氮唑法观察野生型NF2 Ⅱ亚型基因对大鼠神经鞘瘤细胞增殖的影响.结果 经序列分析证实,克隆的NF2 Ⅱ亚型基因与Genebank中的序列完全一致.DNA琼脂糖凝胶电泳检测显示,经双酶切后的质粒pEGFP cDNA片段大小约为4700 bp;NF2 Ⅱ亚型基因cDNA片段大小为1 770 bp,NF2 Ⅱ亚型基因的真核表达载体可瞬时转染人胚胎肾细胞293,通过荧光显微镜和Western Blotting方法得到证实;水溶性四氮唑法检测显示,转染pEGFP-NF2 Ⅱ亚型并表达NF2 Ⅱ亚型编码蛋白的293细胞与对照组293细胞的增殖指数相同.结论 所构建的野生型NF2 Ⅱ亚型基因真核表达载体可在人胚胎肾细胞293中表达,且不具有抑制肿瘤细胞增殖的特性.

关键词：基因、神经纤维瘤病2型、聚合酶链反应、质粒、转染、基因表达

所属期刊栏目：7

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：上海市科委资助项目04qmh1414;上海市科委资助项目06ZR14064

在线出版日期：2007-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：347-351