shRNA沉默GnT-Ⅴ基因表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

摘要：

目的 构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnT-Ⅴ)的小片段发夹状RNA (shRNA)表达质粒,研究shRNA表达质粒沉默GnT-Ⅴ基因后对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计针对GnT-Ⅴ基因的小干扰RNA(siRNA)靶序列,构建shRNA表达载体并转染PC-3细胞,通过G418筛选,建立稳定表达GnT-Ⅴ基因的细胞株,采用RT-PCR和蛋白质印迹检测GnT-Ⅴ mRNA和蛋白的表达,并通过CCK-8增殖实验、流式细胞仪评价GnT-Ⅴ shRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响.结果 成功构建了GnT-Ⅴ shRNA表达质粒,且该质粒明显下调GnT-Ⅴ的表达;PC-3细胞GnT-Ⅴ/1079的mRNA和蛋白质水平的抑制率分别为76.5%和67.0%,对PC-3细胞呈明显抑制效应;CCK-8增殖实验显示,与对照组相比,PC-3 GnT-Ⅴ/1079的增殖受到明显抑制(P＜0.01),以48 h为著;流式细胞仪检测结果表明,PC-3 GnT-Ⅴ/1079的凋亡率明显增加(P＜0.05).结论 shRNA GnT-Ⅴ能显著降低GnT-Ⅴ基因的表达水平,从而有效抑制PC-3细胞增殖,并促进细胞凋亡,该GnT-Ⅴ的siRNA序列可能成为治疗前列腺癌的有效靶点.

关键词：前列腺肿瘤、RNA干扰、GnT-Ⅴ基因、细胞增殖、细胞凋亡

所属期刊栏目：5

分类号：R73;R28

资助基金：广东省科技计划项目2011B031800108

在线出版日期：2013-09-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：151-154