Fibulin-5基因慢病毒表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建Fibulin-5基因的慢病毒表达载体.方法 从pBluescript-Fibulin5质粒中克隆出Fibulin-5基因,将其连同慢病毒载体质粒pCDH-CMV-MCS-EF1双酶切,使目的 基因连接到载体质粒中,构建成重组慢病毒载体质粒pCDH-F5.对重组慢病毒载体质粒pCDH-F5进行酶切鉴定和测序鉴定后,制备包装病毒并感染膀胱癌细胞系5637,检测细胞中Fibulin-5基因的表达水平.结果 构建的重组慢病毒载体质粒pCDH-F5进行PCR及酶切鉴定,获得的克隆和酶切产物与预计的基因片段大小一致.所获得的Fibulin-5基因经测序后与报道序列对比仅有1处突变,且属同义突变,说明pCDH-F5中携带正确的Fibulin-5基因.通过感染5637细胞,发现构建的慢病毒转染效率达95%以上,且能有效表达Fibulin-5基因.结论 实验成功构建了Fibulin-5基因的慢病毒表达载体.

关键词：Fibulin-5、慢病毒表达载体

所属期刊栏目：4

分类号：R57;S85

在线出版日期：2012-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：85-89