牙龈卟啉单胞菌prtH基因水解活性区域的表达

摘要：

目的 克隆、表达牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)prtH蛋白水解酶活性结构域(prtHN),制备多克隆抗体,检测其特异性.方法 采用Generunner软件分析prtH蛋白水解酶活性结构域prtHN片断,PCR扩增prtHN片段并进行DNA序列测定;构建原核表达质粒pQE30-prtHN,E.coliJM109表达prtHN重组蛋白,镍亲和柱纯化,SDS-PAGE分析鉴定;以兔抗P.g菌体抗体和抗膜泡抗体进行Western blot分析重组蛋白免疫原性.制备兔抗prtHN多克隆抗体,不同菌种牙周致病菌Western blot检测抗体特异性.结果 克隆重组基因测序结果与GenBank中P.gingivalis RgpA蛋白酶的基因序列U15282一致.SDS-PAGE显示,IPTG诱导的E.coliJM109(pQE30-prtHN)以包涵体形式表达14KDa的重组蛋白.Western blot检测证实其具有免疫原性.所制备的兔抗prtHN多克隆抗体具有特异性.结论 成功克隆,原核表达的prtHN蛋白具有免疫原性.prtHN蛋白的多克隆抗体具有菌种反应特异性.

关键词：牙龈卟啉单胞菌、prtHN基因、基因克隆、免疫原性

所属期刊栏目：21

分类号：R78(口腔科学)

资助基金：国家自然科学基金30171009

在线出版日期：2007-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：26-29