柚皮苷通过调控RAW264.7细胞功能影响MC-3T3-E1细胞的成骨分化
背景:柚皮苷作为一种中药单体,具有抗炎、促进成骨和抗癌等作用;RAW264.7巨噬细胞在骨破坏过程中发挥重要作用.有研究发现降低炎症水平可以促进MC-3T3-E1细胞的成骨分化,所以通过抑制炎症相关通路,可能对成骨细胞分化具有促进作用.目的:观察柚皮苷通过调控RAW264.7细胞功能是否会影响MC-3T3-E1细胞的成骨分化.方法:采用CCK-8法检测不同浓度柚皮苷对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的毒性.将RAW264.7细胞分成7组:即对照组(DMEM培养基)、炎症模型组(1 mg/L脂多糖)和柚皮苷组(1 mg/L脂多糖+50,100,150,200,250μmol/L柚皮苷),通过RT-PCR检测炎症因子mRNA水平变化,筛选出抗炎浓度较好的3组(150,200,250μmol/L柚皮苷组)数据用于后续实验.将RAW264.7细胞分成4组:炎症模型组、150,200,250μmol/L柚皮苷组分别取各组的上清液制备炎症上清液.最后将上述制取的炎症上清液与成骨诱导培养基1:1比例混合共同培养MC-3T3-E1细胞并分为5组:对照组、炎症模型组、150,200,250μmol/L柚皮苷组,培养7,14 d进行成骨相关基因的检测,并进行碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性实验.结果 与结论:①1 mg/L的脂多糖对巨噬细胞无毒性作用,200μmol/L柚皮苷对脂多糖诱导的巨噬细胞有细胞毒性作用(P<0.05);②筛选药物抗炎浓度过程中,与对照组相比柚皮苷浓度为150,200,250μmol/L时抗炎效果较好(P<0.05),此3组浓度用于后续实验;③碱性磷酸酶染色结果显示,与对照组相比柚皮苷浓度200μmol/L时染色效果最好,且14 d比7 d染色效果更佳;④与对照组相比,200μmol/L柚皮苷组的成骨基因mRNA表达水平最接近对照组,成骨效果最差的为炎症模型(P<0.05);⑤碱性磷酸酶活性实验中,7 d时与对照组相比,柚皮苷浓度为200μmol/L时碱性磷酸酶活性最强(P<0.05);与炎症模型组相比,柚皮苷浓度为200μmol/L时最佳(P<0.05);14 d时,与对照组相比,200μmol/L组无显著差异;与炎症模型组相比,200μmol/L组活性最强;⑥以上结果证明,柚皮苷通过调节RAW264.7巨噬细胞功能可改善炎症状态下MC-3T3-E1细胞的成骨分化.
柚皮苷、抗炎、成骨、MC-3T3-E1细胞、RAW264.7细胞
27
R459.9;R318;R285(治疗学)
国家重点研发计划2021YFE0108000
2022-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
1205-1210
