低氧诱导c-Kit+骨髓间充质干细胞增殖及旁分泌中ROCK信号的作用
背景:研究显示低氧能刺激骨髓间充质干细胞增殖,但具体机制尚不清楚.ROCK信号对细胞增殖、凋亡等具有重要影响,当前对ROCK信号与骨髓间充质干细胞的生物学功能研究较少.目的:分析ROCK信号在低氧诱导c-Kit+骨髓间充质干细胞增殖及旁分泌中的作用.方法:贴壁法获得大鼠股骨骨髓间充质干细胞,应用磁激活细胞分选法获得c-Kit+亚群,细胞培养于常氧(体积分数21％O2)及低氧(体积分数2％O2)条件下,并用ROCK信号抑制剂Fasudil(10μmol/L)处理细胞.观察:①Western blot检测p-MLC2(T18/S12)和MLC2蛋白表达,以p-MLC2(T18/S12)/MLC2比值变化反映ROCK信号的活化情况;②细胞计数分析细胞增殖,Western blot检测细胞增殖标记物PCNA和细胞周期相关蛋白的表达;③流式细胞术检测细胞周期的变化;④ELISA检测细胞培养上清中血管内皮生长因子、转化生长因子β1和碱性成纤维细胞生长因子水平,了解细胞的旁分泌情况.结果与结论:成功分选出大鼠c-Kit+骨髓间充质干细胞.①相对于常氧而言,低氧显著下调MLC表达和上调p-MLC(T18/S19)表达进而增加p-MLC(T18/S19)/MLC2比值;②低氧促进c-Kit+骨髓间充质干细胞的增殖,表现为细胞数量增多和PCNA蛋白表达上调,Fasudil减弱了低氧诱导的c-Kit+骨髓间充质干细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期并抑制CDK2、CDK4和上调p16的表达;③低氧显著促进c-Kit+骨髓间充质干细胞分泌上述3种细胞因子,Fasudil减弱低氧诱导的血管内皮生长因子和转化生长因子β1但上调碱性成纤维细胞生长因子的分泌.实验结果提示低氧刺激促进c-Kit+骨髓间充质干细胞增殖和旁分泌并活化ROCK信号;Fasudil抑制低氧诱导的细胞增殖和旁分泌作用,提示ROCK信号对c-Kit+骨髓间充质干细胞的增殖和旁分泌具有重要的正性调节作用.
ROCK信号、Fasudil、低氧、干细胞、骨髓间充质干细胞、c-Kit、细胞增殖、旁分泌、国家自然科学基金
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R459.9;R394.2(治疗学)
国家自然科学基金项目81670254;项目负责人:揭伟;广东省科技计划项目2016A020214016;广东省"扬帆计划"高层次人才项目4YF16007G
2019-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
3281-3288
