过表达基质细胞衍生因子1基因促进骨髓间充质干细胞增殖和迁移
背景:基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor,SDF-1)/CXCR4轴不仅能够促进骨髓间充质干细胞向损伤组织迁移,而且具有抑制骨髓间充质干细胞凋亡、增加骨髓间充质干细胞存活率及增殖活性等作用.目的:建立慢病毒介导的稳定过表达 SDF-1α 的骨髓间充质干细胞系,在体外观察其对骨髓间充质干细胞增殖和迁移的影响.方法:构建过表达SDF-1α重组慢病毒载体(pNL-SDF-1α-IRES2-EGFP),并以空载体质粒pNL-IRES2-EGFP、基因沉默质粒GV-118-SDF-1α-siRNA作为实验对照,分别转染293T细胞和骨髓间充质干细胞,建立稳定过表达SDF-1α的骨髓间充质干细胞系:SDF-1α-BMSCs组、null-BMSCs组和siRNA-BMSCs组;采用RT-PCR、Western Blot 方法检测 SDF-1α mRNA 和蛋白的表达水平;MTT 法检测骨髓间充质干细胞的增殖能力;Transwell迁移实验检测SDF-1α对骨髓间充质干细胞迁移能力的影响.结果与结论:①成功构建pNL-SDF-1α-IRES2-EGFP质粒,经测序结果表明pNL-SDF-1α-IRES2-EGFP重组质粒构建成功;② 慢病毒转染48 h 后可见293T 细胞和各组骨髓间充质干细胞强烈表达 EGFP;③SDF-1α-BMSCs组高效表达SDF-1α,siRNA-BMSCs组SDF-1α表达明显被抑制;④SDF-1α-BMSCs组的细胞增殖能力增强,SDF-1α可明显促进骨髓间充质干细胞的跨膜迁移.在抗SDF-1α多抗作用后各组细胞迁移指数明显下降;⑤结果可见,慢病毒载体可介导外源性基因 SDF-1α 在大鼠骨髓间充质干细胞中高效表达,并促进骨髓间充质干细胞的增殖和迁移.
干细胞、细胞培养与分化、慢病毒、基质细胞衍生因子、骨髓间充质干细胞、过表达基因、细胞增殖、迁移、福建省自然科学基金
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R394.2
福建省自然科学基金2014J01332 the Natural Science Foundation of Fujian Province, No. 2014J01332
2018-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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