miR-155通过抑制SMAD5调控成骨细胞骨分化

摘要：

背景：诱导成骨细胞分化为骨细胞是组织工程中的研究热点，但分化过程中的调节机制尚未完全阐明。MicroRNA是一类内源性小RNA分子，可通过与靶基因mRNA的3’端非编码区结合在转录后水平调控基因表达。研究证实，microRNA在骨细胞分化过程中起到重要的调节作用。<br>　　目的：研究miR-155对成骨细胞骨分化的调节作用以及作用机制。<br>　　方法：取小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞，加入小鼠骨形态发生蛋白2(200μg/L)进行成骨诱导，并与诱导第1，3，7，14天，通过qRT-PCR检测miR-155 mRNA的表达。并将MC3T3-E1细胞分为对照组、诱导组、miR-155组和miR-155 inhibitor组，对照组用α-MEM培养基培养，诱导组在培养基中加入骨形态发生蛋白2进行成骨诱导，miR-155组和miR-155 inhibitor组在成骨诱导之前分别转染miR-155和miR-155拮抗剂，诱导2周。<br>　　结果与结论：①茜素红染色及碱性磷酸酶活性测定：经骨形态发生蛋白2诱导后，miR-155 mRNA表达呈时间依赖性下调。诱导组MC3T3-E1细胞茜素红着色强度、碱性磷酸酶活性和mRNA表达也显著高于对照组(P<0.01)；miR-155组茜素红着色强度明显低于诱导组，碱性磷酸酶活性和mRNA也明显低于对照组(P<0.01)，而miR-155 inhibitor组则呈反向变化(P<0.05)；②荧光报告基因检测和western blot检测：miR-155可与SMAD5 mRNA 3’非编码区结合，并明显降低MC3T3-E1细胞中SMAD5蛋白和mRNA表达(P<0.01)。结果表明，miR-155可通过负性调控SMAD5表达，抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化。

关键词：组织构建、骨细胞、成骨细胞、microRNA、分化、小鼠、SMAD5、细胞、碱性磷酸酶、qRT-PCR、mRNA、国家自然科学基金

所属期刊栏目：21

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：国家自然科学基金81600016

在线出版日期：2017-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：538-544