制备转基因模型小鼠的基础：人白细胞抗原A*0206基因慢病毒载体构建及鉴定

摘要：

背景：有研究表明人白细胞抗原-A*0206亚型与鼻咽癌的发生正相关，但目前还没有相应的转基因动物模型，以用于从整体水平评价HLA-A*0206与鼻咽癌的关系及进一步研究免疫和基因疗法。目的：构建 pLVX-CMV-人白细胞抗原-A*0206-HA-mCMV-ZsGreen 载体，并进行病毒包装，以用于HLA-A*0206转基因小鼠制作。方法：合成HLA-A*0206序列，利用聚合酶链式反应在5’端引入Eco RⅠ酶切位点，在3’端引入Bam HⅠ酶切位点和流感病毒血凝素标签，Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切目的片段及pLVX-CMV-mCMV-ZsGreen质粒，连接酶切产物，转化到大肠杆菌 JM109感受态细胞，双酶切及测序鉴定阳性重组质粒，阳性重组质粒与四质粒包装系统共转染表达SV40大T抗原的人肾上皮细胞系293T细胞，产生含目的基因的慢病毒。结果与结论：凝胶电泳及测序证实人白细胞抗原A*0206基因成功导入pLVX-CMV-mCMV-ZsGreen骨架质粒，转染293T细胞48 h后的转染率为92%。荧光法测定病毒滴度，获得病毒滴度约为5×108。结果证实，实验成功构建了含巨细胞病毒启动子、HLA-A*0206、流感病毒血凝素标签以及ZsGreen报告基因的慢病毒。

关键词：组织构建、组织工程、鼻咽癌、转基因小鼠、慢病毒、人白细胞抗原、绿色荧光蛋白、四质粒包装系统、流感病毒血凝素、巨细胞病毒启动子、质粒

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：广东省科学技术厅科技基础条件建设项目2011B060300020

在线出版日期：2015-08-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：3813-3817