人脐带间充质干细胞生物特性比较：胰酶冷消化和组织块法体外培养

摘要：

背景：以往采用胰酶冷消化法培养脐带间充质干细胞的研究较少。目的：比较两种方法体外培养人脐带间充质干细胞的生物学特性。<br>　　方法：采用胰酶冷消化法和组织块法从人脐带中分离、纯化和传代培养人脐带间充质干细胞，记录首次出现贴壁细胞时间及原代培养周期，倒置相差显微镜观察脐带间充质干细胞的形态及生长情况，制作第3代脐带间充质干细胞生长曲线，流式细胞仪分析检测第3代脐带间充质干细胞表面标志的表达，第3代脐带间充质干细胞加入成神经诱导培养基诱导分化第3天行荧光免疫化学染色检测Nestin的表达。<br>　　结果与结论：使用上述两种方法均可获得脐带间充质干细胞，胰酶冷消化法首次出现贴壁细胞时间早于组织块法(P <0.05)；原代培养周期差异无显著性意义(P >0.05)。倒置相差显微镜下细胞均为贴壁生长，形态为成纤维细胞样，但胰酶冷消化法培养的少数原代细胞呈多角形，不规则，细胞的体积较组织块法大。组织块法获得第3代细胞的增殖速率显著快于胰酶冷消化法，在进入对数生长期后各个时间点细胞数量差异有显著性意义(P<0.05)。两种细胞具有均一的细胞表型，均表达CD29，CD105，不表达CD34，CD45。两种方法培养出来的第3代脐带间充质干细胞经诱导后，免疫荧光均显示神经干细胞特征性标志物nestin阳性表达。结果表明胰酶冷消化法与组织块法均能培养出脐带间充质干细胞，但组织块法更适合于此类细胞的培养，对细胞的伤害更低。

关键词：干细胞、脐带脐血干细胞、胰酶冷消化法、组织块法、脐带间充质干细胞、组织工程、生物学特性

分类号：R394.2

资助基金：新疆医科大学科研创新基金项目XJC2012117

在线出版日期：2014-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：6614-6619