低氧诱导因子1α慢病毒载体转染骨髓间充质干细胞的成骨基因表达

摘要：

背景：成骨作用和血管发生在骨的形成和修复过程中紧密结合，而低氧诱导因子1α被认为是促血管新生相关基因调控中最重要的核心转录因子，其可促进缺氧部位血管的形成，进而促进骨的形成。<br>　　目的：构建野生型和点突变型两个低氧诱导因子1α慢病毒真核表达载体 Lenti-HIF1α-IRES-EGFP，并比较其对兔骨髓间充质干细胞成骨基因表达的影响。<br>　　方法：首先根据野生型人源低氧诱导因子1α基因序列信息和确定酶切位点的点突变型序列信息构建低氧诱导因子1α基因野生型和点突变型两个慢病毒真核表达载体；然后采用制备的病毒液转染兔骨髓间充质干细胞。<br>　　结果与结论：免疫荧光显微镜观察显示，转染7 d后野生型组和点突变型组细胞均未见明显荧光，转染14 d后两组细胞均呈现明显的绿色荧光；qPCR定量分析结果表明，转染7 d后即有低氧诱导因子1α和骨形态发生蛋白2基因的显著表达，转染14 d后，两基因仍然显示较高的表达水平。说明实验成功构建野生型和点突变型低氧诱导因子1α基因慢病毒真核表达载体，转染后可以促进兔骨髓间充质干细胞成骨基因的表达。

关键词：干细胞、骨髓干细胞、低氧诱导因子1α、点突变、慢病毒、转染、骨髓间充质干细胞、基因治疗、聚合酶链反应、细胞学实验、骨形态发生蛋白2、国家自然科学基金

分类号：R394.2

资助基金：国家自然科学基金重点项目81070806；浙江省自然科学基金LQ12H14002；上海市科委医学重点课题10JC1413300；杭州市医药卫生科技计划项目2012A015@@@@the National Natural Science Foundation of China, No.81070806;the Natural Science Foundation of Zhejiang Province, No. LQ12H14002;Medical Key Topics of Shanghai Science and Technology Commission, No.10JC1413300;the Medicine and Health Science and Technology Projects in Hangzhou, No.2012A015

在线出版日期：2014-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：57-62