构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体转染人骨髓基质细胞☆

摘要：

背景:骨髓基质细胞不表达端粒酶,因而在体外传代扩增过程中端粒长度逐渐缩短,导致细胞衰老,这是限制其用于细胞治疗应用的一个重要因素.目的:构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体,探讨以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞的可行性.方法:以pReceiver-M02-hTERT质粒为模板PCR扩增获得目的基因.用BP重组系统将目的片段重组到载体pDONR221上.然后使用LR重组系统将目的序列重组到载体pLenti6.3/V5-DEST上.将重组载体与包装质粒充分混合,利用脂质体共转染293FT细胞获得慢病毒颗粒.结果与结论:成功构建人端粒酶催化亚单位慢病毒表达载体,病毒的平均物理滴度为1.07×1012 LP/L.以之转染人骨髓基质细胞,目的基因表达水平有显著提升,细胞正确表达人端粒酶反转录酶蛋白.说明以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞能强化细胞表达人端粒酶催化亚单位.

关键词：人端粒酶催化亚单位、人骨髓基质细胞、慢病毒、转染、物理滴度

分类号：R394.2

在线出版日期：2013-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：7704-7708