小鼠次级淋巴组织趋化因子的原核表达及纯化◆

摘要：

背景:次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC/CCL21)是近年来发现的,具有免疫调节作用及抗肿瘤活性.目的:构建小鼠次级淋巴组织趋化因子原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达重组蛋白.方法:取C57BL/6小鼠淋巴结细胞,体外用Poly(I:C)刺激后提取RNA并反转录,以此cDNA为模板,通过PCR技术扩增出CCL21成熟蛋白编码序列.克隆入原核表达载体pBEn-SBP-SET1a,构建融合表达载体pBEn-CCL21.将表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导后TRICINE-SDS-PAGE电泳分析和鉴定重组蛋白的表达.CCL21融合蛋白经链霉亲和柱层析纯化.结果与结论:实验成功构建了CCL21基因的原核表达载体pBEn-CCL21,并获得相应的融合蛋白.结果显示CCL21可在大肠杆菌中高效表达,经链霉亲和柱层析纯化即可获得CCL21重组目的蛋白.

关键词：原核表达、CCL21、蛋白纯化、大肠杆菌、小鼠

分类号：R318(医用一般科学)

在线出版日期：2012-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：7491-7495