真核表达载体pIRES2-EGFP-PDLIM2的构建及在EJ细胞中的表达

摘要：

背景:核因子κB在肿瘤生成过程中起重要作用,PDLIM2基因可以介导终止核因子κB的活性,解除核因子κB对肿瘤细胞的凋亡抑制作用.目的:克隆人PDLIM2全长基因,构建pIRES2-EGFP-PDLIM2真核表达载体.方法:采用反转录-聚合酶链反应从新鲜膀胱组织总RNA中克隆PDLIM2全长基因,与经Bam HI、Xho Ⅰ相同双酶切的pIRES2-EGFP质粒载体连接,构建重组质粒pIRES2-EGFP-PDLIM2,经酶切及测序鉴定重组质粒中PDLIM2基因的完整性和忠实性.荧光显微镜下观察重组质粒转染的EJ细胞GFP报告基因表达强度,并对转染细胞PDLIM2的表达进行RT-PCR检测.结果与结论:经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的EJ细胞中获得PDLIM2的高效表达.表明用反转录-聚合酶链反应方法成功从膀胱组织中克隆出PDLIM2全长基因,成功构建pIRES2-EGFP-PDLIM2真核表达载体.

关键词：载体、PDLIM2、真核表达、基因克隆、EJ细胞

所属期刊栏目：15

分类号：R318(医用一般科学)

在线出版日期：2011-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1205-1209