实时荧光定量RT-PCR法建立版纳微型猪近交系中厚皮创面转化生长因子表达体系

摘要：

背景:版纳微型猪近交系能较好的模拟人取皮区创面,构建动物模型,检测与创面愈合及瘢痕形成密切相关的转化生长因子的表达.目的:观察创面愈合过程中转化生长因子β1基因的表达情况.方法:利用版纳微型猪近交系4～6月龄猪构建了皮肤创面愈合动物模型,通过提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,对与创面愈合相关密切的转化生长因子β1基因进行了RT-PCR扩增.纯化目的片段并与pMD18-T载体连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR.结果与结论:建立的转化生长因子β1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法特异性较好,检测灵敏度可达103 拷贝/μL,线性范围达103～109拷贝/μL,阈值循环数与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在良好的线性关系(R2=0.988),扩增效率高(E=107.433%).利用该检测体系检测了45份样品,效果良好,该方法可为研究TGF-β1基因在创面愈合过程中的作用机理奠定分子生物学基础.

关键词：版纳微型猪近交系、实时荧光定量、转化生长因子、基因克隆、质粒标准品、基因表达

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分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：昆明医学院研究生创新基金"藻酸盐敷料对创面中VEGF、TGF-β1及bcl-2/bax因子表达的影响"2009S030

在线出版日期：2011-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1186-1190