猪外周血内皮祖细胞的体外分离培养及鉴定
背景:内皮祖细胞是一种能直接分化为血内皮细胞的前体细胞,研究表明猪的心血管解剖结构较其他低等哺乳动物更接近于人类,用其建立心血管疾病模型更具临床意义.目的:拟在体外建立猪外周血内皮祖细胞的分离培养方法.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-09/2008-05在美国纽约州布法罗大学心血管疾病研究中心和首都医科大学病理生理学教研室完成.材料:12周龄健康成年猪6只,由布法罗大学实验动物中心提供.方法:采集猪外周血,以梯度密度离心法分离血单核细胞,按3×107/孔密度接种于预先包被Ⅰ型鼠尾胶原的6孔培养板,每孔加入EGM-2内皮细胞生长培养液2 mL,贴壁法纯化扩增,取传至第2代细胞用于指标检测.主要观察指标:采用免疫荧光染色和流式细胞仪检测内皮祖细胞表面抗原的表达,通过内吞DU-acLDL和Matrigel血管形成实验进行细胞功能学鉴定,将第2～10代细胞按500个/孔接种后检验其克隆形成能力.结果:猪外周血单核细胞体外培养7～10d后,出现呈铺路石样的细胞克隆,表达内皮祖细胞表面抗原CD9,CD31,CD105,VE-Cadherin,VEGFR2和内皮源性一氧化氮合酶,部分细胞表达干细胞标志c-Kit,但不表达CD133和造血祖细胞标志CD45.细胞能内吞Dil-acLDL,在Matrigel上可以形成毛细血管样结构,且具有很强的克隆形成能力.第2,4,6,8,10代细胞克隆数及内皮祖细胞总数均基本相似(F=0.167,F=0.195,P>0.05).结论:梯度密度离心联合贴壁法可成功从猪外周血中分离培养出内皮祖细胞,体外扩增后细胞增殖能力无变化.
内皮祖细胞、克隆、猪、外周血
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R394.2
国家自然科学基金;北京市自然科学基金
2009-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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