催乳素对葡萄球菌肠毒素A诱导T细胞凋亡的影响

摘要：

目的:观察作为重要细胞因子的催乳素在T细胞活化诱导凋亡过程中的作用.方法:实验于2005-03/2006-06在校级实验室新乡医学院免疫学实验室完成.实验材料:正常人外周血由新乡医学院第一附属医院提供,葡萄球菌肠毒素A(sigma).实验方法:①T细胞活化诱导凋亡模型的建立:取健康人外周血5 mL,加入等体积淋巴细胞分离液,采用密度梯度离心法获得淋巴细胞.完全1640培养基重悬细胞,加入葡萄球菌肠毒素A(SEA),置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养,至第4天,800 r/min离心10 min,以新鲜完全1640培养基换液,尽可能除去SEA.培养液中加入人白细胞介素2继续培养2周待用.②催乳素干预:将获得细胞离心并弃去培养液,用新鲜完全1640培养基重悬,调整细胞密度为5x109 L-1,加入24孔板中,分别加入4 mg/L SEA诱导细胞凋亡,同时加入20,300,1 000 μg/L催乳素,以不加催乳素的为对照组.③实验评估:于培养0,16,24 h时采用MTT法检测T细胞增殖情况.培养16 h时用流式技术检测细胞凋亡情况,并通过琼脂糖凝胶电泳检测T细胞凋亡DNA,并采用流式细胞术检测T细胞膜表面Fas和FasL,Western Blot法检测T细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax.结果:①MTT法检测T细胞增殖:不同质量浓度催乳素干预组在16,24 h的T细胞数量较对照组明显增多[吸光度值:对照组:0.65±0.02,0.54±0.04;20 μg/L催乳素组:0.81±0.04,0.71±0.11;300 μg/L催乳素组:1.14±0.10,1.22±0.10;1 000μg/L催乳素组:1.12±0,12,1.22±0.12,P＜0.01].0～24 h内300,1 000μg/L催乳素组T细胞数量呈上升趋势(P＜0.01),20μg/L催乳素组T细胞数量呈下降趋势(P＜0.01).②流式细胞术检测T细胞凋亡率:培养16h时,与对照组比较,各质量浓度催乳素干预组T细胞凋亡率降低[(46.80±9.21)%,(31.40±7.03)%,(17.50±4.29)%,(10.20±3.84)%,P＜0.05].③流式细胞术检测T细胞膜表面Fas、FasL:与对照组比较,各质量浓度催乳素干预组Fas和FasL细胞阳性率均下降[Fas:(88.0±17.3)%,(43.0±13.1)%,(22.0±6.7)%,(25.0±8.2)%,P＜0.01;FasL:(46.0±17.5)%,(33.0±11.4)%,(31.0±14.0)%,(28.0±13.8)%,P＜0.05].④Western Blot检测T细胞Bcl-2、Bax:与对照组比较,20μg/L催乳素组Bax和Bcl-2表达均无明显差异(P＞0.05),300 μg/L,1 000μg/L催乳素组Bax表达明显降低(P＜0.05),Bcl-2表达明显升高(P＜0.05).结论:在葡萄球菌肠毒素A诱导的T细胞活化诱导凋亡过程中,催乳素以细胞因子的身份,可通过抑制Fas、FasL和Bax表达,提高Bcl-2表达,来抑制T细胞凋亡,维持T细胞增殖.

关键词：葡萄球菌肠毒素A、催乳素、T细胞、活化诱导凋亡

所属期刊栏目：11

分类号：R392.114

资助基金：河南省科技攻关项目991170318

在线出版日期：2007-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：5377-5381