丹参素和丹酚酸对胎鼠脑神经干细胞迁移的诱导

摘要：

目的:以丹参水溶性成分丹参素、丹酚酸为干预药物,观察其对胎鼠脑神经干细胞迁移的诱导作用.方法:实验于2006-03/08在广州暨南大学医学院完成.①丹参素(粉剂,纯度大于90%,昆明长春花科技公司生产,批号1108552200203);丹酚酸(粉剂,纯度大于90%,昆明长春花科技公司生产,批号CCH601012);MBG96型趋化小室(Neuro Probe公司).②取妊娠13.5 d昆明种小鼠2只,处死后取出粉鼠,分离其胎脑神经下细胞进行传代培养.取培养至对数生长期的细胞,采用Boyden小室法观察细胞迁移情况.取单细胞悬液50 μL,分别加人Boyden小室的12个上室;取分别含有5,10,20,40,80,100 mg/L丹参素和5,10,20,40,80,100 mg/L丹酚酸的DMEM培养基各450 μL,加入Boyden小室的12个下室;另2孔以不含丹参素和丹酚酸的DMEM培养基作为空白对照.上下两室以预先包被Ⅰ型胶原的聚碳酸酯微孔滤膜相隔.将Boyden小室置于37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养24 h,取出徽孔滤膜,用甲醇将迁移至微孔滤膜下层的细胞固定,Nissl染色,显微镜下随机选择3个不同视野,计数膜上不同层次的细胞数.③选取昆明种小鼠18只,随机数字表法分为生理盐水对照组、丹参素组、丹酚酸组,6只/组.丹参素组于侧脑室内连续注射80 mg/L丹参素5 μL,丹酚酸组注射40 mg/L丹酚酸5 μL,生理盐水对照组注射等量生理盐水,共3 d,术后14 d处死,取脑,制备切片,行ABC免疫细胞化学染色,观察丹参素和丹酚酸干预后nestin阳性神经元的分布变化.结果:18只小鼠全部进入结果分析.①不同质量浓度的丹参素对神经干细胞迁移诱导:与空白对照比较,5,10 mg/L的丹参素促神经干细胞迁移的作用并不明显(t=1.037,1.374,P＞0.05);20,40 mg/L的丹参素可明显促进神经干细胞的迁移(t=2.894,3.468,P＜0.01);当丹参素质量浓度为80 mg/L时促迁移作用最为强烈(t=4.031,P＜0.01),之后有所减弱.②不同浓度的丹酚酸对神经干细胞迁移的诱导:与空白对照比较,5 mg/L的丹酚酸促神经干细胞迁移的作用并不明显(t=1.365,P＞0.05);10,20 mg/L的丹酚酸可明显促进神经干细胞的迁移(t=3.021,3.947,P＜0.01);当丹酚酸质量浓度为4O mg/L时促迁移作用最为强烈(t=4.342,P＜0.01),之后有所减弱.③丹参素和丹酚酸对小鼠室管膜下nestin阳性神经元迁移的影响:丹参素组侧脑室内侧和外侧的nestin阳性细胞的数量多于生理盐水对照组,而且并不局限于侧脑室周围区,在脑皮质和尾壳核可见少量的阳性细胞,细胞的突起明显,伸向皮质方向,侧脑室内侧的阳性细胞有相似的特征.丹酚酸组侧脑室周围的阳性细胞数量多,而且在皮质和尾壳核检测到大量的阳性细胞.结论:丹参素和丹酚酸均具有诱导胎鼠脑神经干细胞迁移的作用,且丹酚酸的作用优于丹参素.

关键词：脑、干细胞、神经系统/细胞学、中间丝蛋白质类、细胞运动

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分类号：R2(中国医学)

资助基金：广东省广州市科技计划2004J1-C0241

在线出版日期：2007-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1225-1228,1402