β-巯基乙醇和神经生长因子定向诱导鼠骨髓基质细胞分化为神经细胞的验证

摘要：

目的:验证β-巯基乙醇、神经生长因子对大鼠骨髓基质细胞体外定向诱导分化为神经细胞的可行性.方法:实验于2005-05/2006-02在锦州医学院外科实验室完成.①选取清洁级1月龄SD大鼠30只,全骨髓培养法从大鼠骨髓中分离培养骨髓基质细胞.②取第3代骨髓基质细胞,以含胎牛血清的DMEM培养液培养消化后,计数细胞量,描绘细胞增殖曲线.③取第3～5代骨髓基质细胞,接近70%～80%融合后,分为3组:β-巯基乙醇诱导组:加入含1 mmol/L β-巯基乙醇的无血清培养基预诱导24 h后,去除预诱导液,再加入含5 mmol/L β-巯基乙醇的无血清培养基诱导5 h;神经生长因子诱导组:加入碱性成纤维细胞生长因子20 μg/L进行预诱导24 h后,去除预诱导剂,磷酸盐缓冲液洗涤3次,再加入含神经生长因子50 μg/L无血清培养基诱导24 h;阴性对照组:仅加等量无血清培养基.观察各组诱导后细胞的形态学改变.④免疫组化法检测诱导后各组细胞的神经元特异性烯醇化酶、微管相关蛋白和胶质纤维酸性蛋白的表达和分化率.结果:①骨髓基质细胞的生长曲线:培养第1～4天为潜伏期,此后细胞增殖加速并进入对数生长期,第9天达到高峰,以后细胞增值速度减慢,进人平台期.骨髓基质细胞倍增时间约为32 h.②骨髓基质细胞诱导分化后的形态学观察结果:β-巯基乙醇诱导组经β-巯基乙醇诱导1 h,细胞形态即发生改变,胞体收缩成球形或锥形,折光性增强,部分细胞周围有光晕,有较多长突起.5 h后,神经元样细胞明显增多,可形成神经网络状结构,但是死亡细胞逐渐增多;神经生长因子诱导组形态学变化出现较迟,在12 h才有明显的形态学改变,表现为胞体变大,有类似轴突和树突的细长突起.24 h表现更为明显,部分细胞间也可见网络状排列,细胞死亡现象不明显;阴性对照组无明显的形态学改变,仍为长梭形细胞.③神经元样细胞免疫组化测定结果:β-巯基乙醇诱导组、神经生长因子诱导组神经细胞特异性烯醇化酶、微管相关蛋白表达均为阳性,表现为胞体和突起被染成棕黄色,而胶质纤维酸性蛋白呈阴性;阴性对照组无阳性结果出现.β-巯基乙醇诱导组神经细胞特异性烯醇化酶、微管相关蛋白分化率分别为(71.2±3.8)%和(64.1±2.7)%,神经生长因子诱导组分别为(46.2±2.5)%和(42.9±1.9)%,两组间差异有显著性意义(P＜0.05,t=-5.205).结论:β-巯基乙醇、神经生长因子均可成功诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞.

关键词：骨髓细胞、巯基乙醇、神经生长因子、细胞分化、神经元

所属期刊栏目：11

分类号：R3(基础医学)

资助基金：辽宁省自然科学基金20052202

在线出版日期：2007-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：451-454