特定培养基条件下大鼠脂肪间充质干细胞体外定向软骨细胞的分化

摘要：

目的:体外诱导大鼠脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化,并对分化细胞进行相应鉴定,观察脂肪间充质干细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性.方法:实验于2005-05/2006-05在湘雅医院中心实验室完成.①取大鼠腹股沟脂肪,消化分离脂肪间充质干细胞进行原代培养.②流式细胞仪检测第3代脂肪间充质干细胞表面CD29,CD34,CD44表达.③传3代细胞进行微团培养1 d,换用含体积分数为0.01的新生牛血清、10μg/L的转化生长因子β1、6.25 mg/L的胰岛素、6.25 mg/L的转铁蛋白、1×10-7 mol/L的地塞米松、50 mg/L的维生素C的高糖DMEM诱导液,为特定培养条件.④在诱导后4,7,14 d应用阿尔新兰染色、蕃红O/固绿染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学评价软骨形成情况.⑤反转录-聚合酶链反应在诱导后0和14 d检测脂肪间充质干细胞前Ⅱ型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖mRNA的表达.结果:①脂肪间充质干细胞的形态特征:原代脂肪间充质干细胞呈短梭形、梭形及多角形,3代后呈均一长梭形.②脂肪间充质干细胞的表面标志鉴定:脂肪间充质干细胞表达CD29,CD44,基本不表达CD34.③脂肪间充质干细胞诱导后的形态特征:脂肪间充质干细胞经诱导后,由长梭形转变为三角形、多角形或短梭形,逐渐聚集成结节.④脂肪间充质干细胞诱导后的细胞化学染色结果;诱导后脂肪间充质干细胞胞外基质阿尔新兰染色、蕃红O/固绿染色、和Ⅱ型胶原免疫细胞化学着色阳性.⑤反转录-聚合酶链反应检测结果:反转录-聚合酶链反应检测未诱导脂肪间充质干细胞不表达前Ⅱ型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖mRNA基因,而诱导后的脂肪间充质干细胞表达前Ⅱ型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖mRNA基因.结论:脂肪间充质干细胞在由转化生长因子1、胰岛素、转铁蛋白等组成的特定培养基条件诱导下可以定向软骨细胞分化.

关键词：间充质干细胞、脂肪类、细胞分化、软骨

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分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2007-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：435-438