同型半胱氨酸通过核因子κB途径诱导人内皮细胞表达RANTES mRNA和蛋白的表达

摘要：

目的:观察同型半胱氨酸诱导培养人脐静脉内皮细胞表达RANTESmRNA及蛋白,并分析其机制.方法:实验于2004-11/2005-11在新乡医学院分子生物研究室完成.①采用酶消化法分离脐静脉内皮细胞.②当脐静脉内皮细胞生长至汇合状态时,随机分为对照组、同型半胱氨酸组和二硫代氨基甲酸吡咯烷预处理组.对照组用无血清培养基、同型半胱氨酸组用含0.1 mmol/L同型半胱氨酸的无血清培养基培养,分别孵育8 h;二硫代氨基甲酸吡咯烷预处理组用含100 μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷的无血清培养基培养20 min后,再加入0.1 mmol/L的同型半胱氨酸孵育8 h.③采用斑点杂交检测脐静脉内皮细胞中RANTES mRNA的表达.④采用Western blot检测脐静脉内皮细胞中RANTES蛋白的表达.⑤用免疫细胞化学方法检测正常对照组和同型半胱氨酸组核因子κB P65蛋白的表达.结果:①脐静脉内皮细胞中RANTES mRNA的表达:图像分析显示,同型半胱氨酸组、二硫代氨基甲酸吡咯烷预处理组的积分吸光度值分别为18 790和16 420,分别为对照组(积分吸光度值为12 680)的1.48倍和1.29倍.②脐静脉内皮细胞中RANTES蛋白的表达:图像分析显示,同型半胱氨酸组RANTES蛋白印迹条带的积分吸光度值为0.794 2,而二硫代氨基甲酸吡咯烷预处理组的积分吸光度值为0.501 3,分别是对照组(0.293 0)的2.72倍和1.72倍.③脐静脉内皮细胞中核因子κBP65蛋白的表达:在对照组脐静脉内皮细胞中,核因子κB P65蛋白的表达以细胞质为主;同型半胱氨酸刺激后,细胞核染色的阳性率明显增加,由对照组的8.3%上升到43.5%(P＜0.01).结论:同型半胱氨酸能诱导人脐静脉内皮细胞表达RANTES mRNA和蛋白,核因子κB可能参与了该过程.同型半胱氨酸可能通过诱导内皮细胞表达RANTES在动脉粥样硬化形成中起作用.

关键词：高半胱氨酸、RANTES、内皮、血管、动脉硬化

所属期刊栏目：10

分类号：R3(基础医学)

资助基金：河南省自然科学基金0511042301

在线出版日期：2006-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：88-90,插5