人胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中的表达及其降血糖效应

摘要：

背景:随着分子生物学和分子遗传学技术的发展和应用,人们利用基因工程方法进行人胰岛素的生产研究,并从分子水平再造分泌胰岛素的克隆细胞系来替代胰岛素注射和胰岛移植治疗糖尿病.目的:构建并筛选人胰岛素基因真核高效表达载体.设计:随机对照实验研究.单位:中国医科大学实验动物部.材料:实验选取健康成年清洁级昆明小鼠40只,雌雄各半,自由饮水,自由采食人工颗粒料,每日光照14 h,实验动物由长春解放军军需大学实验动物中心提供.大肠肝菌DH5α和幼仓鼠细胞系由实验动物中心保存.方法:常规法构建重组质粒pEF1α-ImINS.将重组质粒pEF1α-ImINS和胰岛素其他3个重组质粒分别转染幼仓鼠肾细胞,经G418筛选,阳性克隆传至20代,分别用放射免疫和免疫组织化学技术方法分析胰岛素和/或胰岛素原在幼仓鼠肾细胞中表达的情况.并用重组质粒pEF1α-ImINS转染幼仓鼠肾细胞的阳性克隆20代的PBS细胞悬浮液(5×107细胞/只)及其培养上清(0.5 mL/只)对昆明小鼠行腹腔注射,通过对注射前后小鼠血糖值测定,分析转基因产物降血糖的生物学效应.主要观察指标:胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中整合和表达的结果,以及注射前后血糖的变化.结果:胰岛素的表达量最高为7.984 mIU/L,胰岛素表达水平的灰度值在幼仓鼠肾细胞质中为177.50±15.10,细胞核中为150.30±21.43;昆明小鼠注射pEF1α-ImINS转染幼仓鼠肾克隆细胞株的悬浮液后6 h血糖值明显下降,与注射前24 h比较,差异有极显著性意义(P＜0.01).结论:幼仓鼠肾细胞中重组质粒pEF1α-ImINS是胰岛素表达量最高的质粒;pEF1α-ImINS转染的克隆细胞株在小鼠体内有胰岛素表达,并且对正常小鼠有降血糖的作用.

关键词：胰岛素、基因、仓鼠、血糖

所属期刊栏目：10

分类号：R3(基础医学)

资助基金：吉林省科技厅科研项目98579

在线出版日期：2006-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：178-180