糖尿病的基因治疗技术:大鼠胰岛素原基因真核细胞表达质粒构建与鉴定

摘要：

目的:构建大鼠胰岛素原基因的真核细胞表达质粒 pCMV/proinsulin并进行序列测定.方法:实验选用雄性 SD大鼠 1只,从大鼠胰腺组织中提取总 RNA,通过 RT-PCR法获得胰岛素原基因 cDNA全长序列,并采用现代分子生物学技术,借助真核细胞表达质粒 pCMV-Script vector具有多克隆酶切位点的特点,选择适当的限制性酶切位点( EcoR Ⅰ和 Hind Ⅲ),并使大鼠胰岛素原基因 cDNA两端带有相同的酶切位点,利用其黏性末端进行定向克隆,从而将大鼠胰岛素原基因准确地插入到表达质粒 pCMV上.结果:经 RT-PCR法扩增并通过 DNA核酸序列测定获得大鼠胰岛素原基因.经 PCR法及酶切法初步筛选阳性克隆重组子,并进一步进行 DNA核酸序列测定(双脱氧末端终止法),确定其序列与目的基因序列完全一致.结论:成功构建重组质粒 pCMV/proinsulin,为进一步进行胰岛素原基因转染糖尿病大鼠和非胰岛β细胞,使之产生胰岛素、建立类胰岛β细胞系的研究奠定了扎实的基础.

关键词：胰岛素/遗传学、胰岛素原、基因疗法、重组、遗传

所属期刊栏目：8

分类号：R587.1(内分泌腺疾病及代谢病)

在线出版日期：2004-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：5844-5846