干扰CLDN6基因表达通过调控MAPK/ERK信号通路对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

摘要：

目的:探讨Claudin-6(CLDN6)在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的表达及其对卵巢颗粒细胞(GC)增殖与凋亡的影响和可能作用机制.方法:SD雌性大鼠皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)诱导建立PCOS模型,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和West-ern blot法检测卵巢组织中CLDN6表达.分离培养原代PCOS大鼠卵巢GC,采用小分子干扰RNA(siRNA)技术和pcDNA3.1质粒转染下调/上调卵巢GC中CLDN6表达水平,RT-qPCR检测转染效果;CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力和凋亡;Western blot法检测细胞CLDN6、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路和增殖、凋亡相关蛋白的表达.结果:CLDN6在PCOS大鼠卵巢组织和GC中呈高表达.转染后,与空白组相比,对照组GC中CLDN6 mRNA和蛋白表达水平、GC活性、Cyclin D1、Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达显著升高,凋亡率、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);与对照组相比,si-CLDN6组GC中CLDN6 mRNA和蛋白表达水平、GC活性、Cyclin D1、Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达显著降低,凋亡率、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),pcDNA3.1-CLDN6组GC中CLDN6 mRNA和蛋白表达水平、GC活性、Cyclin D1、Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达显著升高,凋亡率、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);上调CLDN6表达基础上,ERK1/2抑制剂PD98059可明显减弱CLDN6高表达对GC增殖的促进作用和GC凋亡的抑制作用.结论:CLDN6在PCOS大鼠卵巢组织和GC中呈高表达,下调CLDN6可抑制PCOS大鼠卵巢GC增殖并诱导GC凋亡,其作用机制可能与抑制MAPK/ERK信号通路有关.

关键词：多囊卵巢综合征;Claudin-6;卵巢颗粒细胞;丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶通路;凋亡;增殖

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分类号：R71(妇产科学)

资助基金：河南省医学科技攻关计划联合共建项目No:LHGJ20190319

在线出版日期：2022-02-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：96-101,106