携带OPCML基因的慢病毒表达质粒的构建

摘要：

目的:建立携带和表达OPCML基因的慢病毒(lentiviral viruses,LV)表达质粒.方法:用内切酶将OPCML基因从已构建的表达质粒pcDNA3-OPCML上切下,插入慢病毒载体pWPI-GFP中,构建慢病毒表达质粒pWPI-OPCML,通过酶切、测序和检测验证OPCML蛋白后,将pWPI-OPCML、pCMV-dR8.74和pMDG共转染包装细胞293T,获得重组慢病毒,再感染靶细胞A2780,通过检测标志蛋白-绿色荧光蛋白(GFP)和目的蛋白OPCML进一步验证pWPI-OPCML在细胞中OPCML的表达.结果:(1)pWPI-OPCML中携有正确的OPCML基因,并能在人类细胞中表达;(2)pWPI-OPCML共转染包装细胞293T能产生重组病毒;(3)目的基因OPCML能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞A2780,并达到稳定的表达,转导效率几乎达100%,荧光显微镜下能直接观察到GFP,Western blotting能检测到OPCML和GFP蛋白在靶细胞中的表达.结论:pWPI-OPCML能在人细胞中表达OPCML蛋白,共转染包装细胞获得的重组慢病毒能感染人细胞,作为转基因的工具,具有高效性.

关键词：基因、OPCML、卵巢肿瘤、慢病毒载体、基因转移

所属期刊栏目：15

分类号：R737.31(肿瘤学)

资助基金：美国国立卫生研究院资助项目CA84242;加拿大国家癌症研究基金NCIC 014175;广西留学回国人员科研启动基金0575020

在线出版日期：2006-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：518-521,插1