Ⅰ型粘蛋白单链抗体的制备及其生物学活性的初步研究

摘要：

目的:制备Ⅰ型粘蛋白(MUC1)基因工程单链抗体(scFv),并对其生物学活性进行初步研究.方法:提取纯化MUC1单链抗体原核表达质粒C31,使用酶切和PCR鉴定;采用HBP标记的抗E Tag单克隆抗体进行Western blot,筛选表达量高的菌落,大量扩增后,制备培养上清及胞周质中抗MUC1 scFv;将MUC1高表达的SKOV3细胞铺于96孔板,戊二醛固定后作为包被抗原,将制备的抗MUC1 scFv抗体倍比稀释后利用ELISA方法检测其生物学活性.结果:质粒C31经Sfil酶切后为5308bp,经Sfil、Not Ⅰ双酶切后为4522bp和786bp,PCR扩增片段为1075bp.Western blot结果显示可溶性抗体为30kD.选择表达量高的菌落,进行大量扩增、诱导表达、提取培养液上清及胞周质可溶性抗体,胞周质抗体水平明显高于培养液上清;利用SKOV3作为包被抗原进行ELISA,当培养液上清1:32、胞周质1:2时所测OD值最高.结论:抗MUC1单链抗体表达于细菌的胞周质液和培养液上清,以胞周质液表达量最高;且制备的抗MUC1单链抗体有生物学活性.噬菌体表面呈现技术可大量制备人MUC1噬菌体基因工程单链抗体,可用于靶向治疗.

关键词：基因工程抗体、粘蛋白类、酶联免疫吸附测定

所属期刊栏目：13

分类号：R730.54(肿瘤学)

资助基金：教育部优秀青年教师资助计划199809

在线出版日期：2004-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：34-37