地涌金莲MlCCD8b基因的克隆与表达分析

摘要：

该研究以地涌金莲(黄色苞片型YN01和红色苞片型RD05)为材料,采用RACE技术克隆获得地涌金莲CCD8b基因的cDNA全长,进行氨基酸序列比对及系统进化树构建,并采用实时荧光定量PCR技术检测Ml-CCD8b基因在不同地涌金莲类型和不同组织中的表达模式.结果表明:(1)序列分析显示,MlCCD8b的ORF全长1671 bp,编码556个氨基酸,存在1个类胡萝卜素加氧酶家族的典型保守结构域RPE65,推测其相对分子量为61574.26 Da,等电点6.61,亚细胞定位于叶绿体基质中的类囊体上,所编码的MlCCD8b蛋白为亲水性蛋白.(2)同源对比分析及构建系统进化树发现,地涌金莲MlCCD8b蛋白与小果野蕉亚种、凤梨等单子叶植物的CCD8b蛋白遗传关系最近.(3)荧光定量PCR检测结果表明,MlCCD8b在吸芽数量多的黄色苞片型YN01的所有组织中均有表达,而在吸芽数量少的红色苞片型RD05中,其苞片内未能检测到MlCCD8b的表达,但其他组织中皆有表达;MlCCD8b在2种类型地涌金莲中呈现一致的组织表达特异性,即在花序轴中的表达量最高,其次是吸芽芽点、根尖和叶片,在苞片中的表达量最低或不表达.(4)2种类型地涌金莲同一组织部位比较结果显示,RD05的花序轴、吸芽芽点、根尖和叶片中的MlCCD8b相对表达量分别是YN01的4.47、4.67、2.09和1.10倍.(5)利用高效液相色谱-串联质谱法测得RD05根尖部位的5-脱氧独脚金醇含量是YN01的15.57倍,与MlCCD8b在根尖的表达趋势一致.研究认为,MlCCD8b基因可能通过调控独角金内酯的合成,促进或抑制地涌金莲吸芽的萌生.该研究结果可为MlCCD8b基因的生物学功能研究提供依据,并为今后通过分子辅助育种调控MlCCD8b的表达,从而控制地涌金莲吸芽数量提供理论支持.

关键词：地涌金莲、CCD8、独脚金内酯、克隆、表达分析

所属期刊栏目：40

分类号：Q785;Q786;S682(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金CAFYBB2019ZB007

在线出版日期：2021-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2008-2016