拟南芥Antiquitin基因的原核表达和生物信息学分析

摘要：

将拟南芥Antiquitin基因重组到原核表达载体pMAL-c4x和pET41中,在T7 Express菌株中诱导表达,经Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化获得重组蛋白.SDS-PAGE结果表明:MBP和His-tag融合的拟南芥Antiquitin主要以可溶性形式存在,表达量分别占细胞总蛋白的25.1%和39.4%.以乙醛和NAD~+为底物测定融合蛋白活性,结果显示:His-tag融合的Antiquitin具有醛脱氢酶活性,比活力为8.98 U/mg,乙醛的表观K_m和V_(max)值分别为0.98 mmol/L和12.75 U/mg.序列比对和结构预测结果显示:拟南芥Antiquitin包含该家族蛋白典型的催化结构域、NADH结合结构域和寡聚化结构域,活性中心残基为Gly238、Gly291、Glu391、Phe393.

关键词：拟南芥、Antiquitin、重组表达、亲和纯化、NADH

所属期刊栏目：29

分类号：Q811.4(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金30300222;西北农林科技大学优秀人才基金042R009

在线出版日期：2010-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2378-2384